間充質(zhì)干細胞與未成熟樹突狀細胞聯(lián)合胰島細胞移植治療小鼠糖尿病.pdf

1、胰島移植手術(shù)操作簡單，可減少外源胰島素使用，降低并發(fā)癥風險，有望成為糖尿病最終治療方案。近年來，隨著胰島移植研究的廣泛開展，胰島移植技術(shù)也取得了很大進展，但是胰島數(shù)量不足以及術(shù)后免疫排斥反應(yīng)仍然是胰島移植最終進入臨床階段的最大阻礙。本論文在探究建立高效胰島分離技術(shù)以及胰島移植治療糖尿病小鼠的基礎(chǔ)上，進一步探究了移植后利用未成熟樹突細胞(immature dendritic cells，imDCs)與間充質(zhì)干細胞(mesenchymal

2、stemcells，MSCs)誘導胰島移植物免疫耐受的潛在機制和應(yīng)用價值。
　　本文的主要研究內(nèi)容歸納如下:
　　1.建立了糖尿病小鼠模型。本研究利用鏈脲佐菌(STZ)能選擇性對胰島β細胞造成損傷的特點，按照100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg的劑量，一次性腹腔注射小鼠，進行造模。研究結(jié)果表明，對于小鼠而言，150mg/kg劑量造模效果最佳，200mg/kg劑量的STZ雖然也能快速導致小鼠血糖升高，但是此劑量

3、可能對于小鼠機體損傷較大，導致部分小鼠死亡，不利于模型的建立。
　　2.建立了分離純化大鼠胰島細胞方法。胰島移植物質(zhì)量和數(shù)量不足是影響胰島移植效果的重要原因，本研究通過改進胰腺膠原酶灌注消化和密度梯度離心方法純化胰島，提高了胰島的產(chǎn)量和質(zhì)量，獲得了滿意的效果。
　　3.成功分離培養(yǎng)了未成熟樹突細胞(imDCs)和骨髓間充質(zhì)干細胞(BM-MSCs)。將培養(yǎng)的樹突細胞經(jīng)流式細胞儀分析鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠骨髓來源的樹突細胞高表達CD

4、11c(89.9％)，中度表達MHC-Ⅱ(36.61％)，低表達CD80(5.03％)、CD86(1.5％)，符合imDC表面標志物的特征;對培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞進行體外成骨和成脂誘導分化，結(jié)果表明貼壁法培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞同樣具有多項分化潛能.
　　4.將imDCs與MSCs應(yīng)用于胰島移植治療糖尿病小鼠中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)胰島與未成熟樹突細胞混合移植雖未顯著延長移植物的存活時間(12±2.31 d)，但能顯著降低其血糖水平;胰島與間充質(zhì)干細