絲素蛋白-殼聚糖肛瘺栓組織工程初步研究.pdf

1、目的：1、制備絲素蛋白-殼聚糖（SFCS）新型高分子材料，通過(guò)表征觀察，降解實(shí)驗(yàn)，研究符合組織工程要求的兩者最優(yōu)配置比例。2、使用絲素蛋白-殼聚糖復(fù)合材料進(jìn)行生物相容性實(shí)驗(yàn)，初步評(píng)估其作為高分子醫(yī)用材料應(yīng)用到肛瘺栓上的可行性。
　　方法：1、絲素蛋白-殼聚糖三維多孔支架的制做；使用氯化鈣-醇-水體系（CaCL2：C2H5OH:H2O=1:2:8）溶解，經(jīng)透析、濃縮、離心獲得2％的絲素蛋白溶液，殼聚糖溶解于醋酸溶液中配制出3%的殼聚

2、糖溶液，將二者以不同的比例混合，裝模、冷凍干燥、交聯(lián)，獲得絲素蛋白-殼聚糖三維支架產(chǎn)品。
　　2、材料表征實(shí)驗(yàn)；采用掃描電子顯微鏡測(cè)試法，觀察支架材料的特征，計(jì)算出材料的溶脹率、吸水率、孔隙率。
　　3、材料靜態(tài)降解實(shí)驗(yàn)；在磷酸鹽緩沖溶液（PBS溶液）中放入SFCS復(fù)合材料，降解溫度為37℃的恒溫烤箱中，觀察絲素蛋白-殼聚糖的降解速率及穩(wěn)定性。
　　4、絲素蛋白-殼聚糖復(fù)合材料的細(xì)胞生物相容性評(píng)價(jià)。將 SFCS進(jìn)行溶血

3、實(shí)驗(yàn)，將SFCS支架和橡膠的樣條分別植入SD大鼠大腿肌肉，在第7、14、21、28天，四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，分別處死大鼠，分別在創(chuàng)面組織進(jìn)行HE染色、Masson三色染色。
　　結(jié)果：1、通過(guò)絲素蛋白與殼聚糖溶液不同質(zhì)量比相混合后，可以得到不同成分組成的SFCS支架。
　　2、不同配比的SFCS孔隙率值均高于95%。材料的溶脹率和吸水率是隨著殼聚糖比例的增加而變大的。
　　3、體外降解實(shí)驗(yàn)表明在同一時(shí)間點(diǎn)，隨著絲素蛋白含量的增高

4、復(fù)合材料的降解率依次遞減。
　　3、絲素蛋白-殼聚糖復(fù)合材料的溶血率小于5%，符合國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。
　　4、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，4周末，SFCS支架相比對(duì)照組孔內(nèi)部炎癥細(xì)胞幾乎完全消失，被正常細(xì)胞填滿，形成了完整地纖維囊壁結(jié)構(gòu)，膠原含量明顯高于對(duì)照組，膠原纖維較粗大、緊密，趨向更加明顯。
　　結(jié)論：1、將絲素蛋白和殼聚糖相混合，成功地制備出了擁有穩(wěn)定構(gòu)造的三維多孔支架，其中40%SF-60%CS組可作為生物支架研究的首選配比。