鋅離子對(duì)早期腹透相關(guān)性腹膜炎和腹膜巨噬細(xì)胞極化的影響.pdf

1、背景：終末期腎臟疾病(End-stage renal disease，ESRD)是嚴(yán)重危害人類健康的疾病，患者在進(jìn)行腎臟替代治療時(shí)，持續(xù)性不臥床腹膜透析(Continuous ambulatoryperitoneal dialysis，CAPD)是主要的方法之一，然而，在長(zhǎng)期的腹膜透析過(guò)程中，腹膜暴露于生物不相容性的腹膜透析液(Peritoneal dialysis solution，PDS)中，腹膜易受損傷，發(fā)生腹膜炎，并逐漸進(jìn)展為腹

2、膜纖維化，導(dǎo)致腹膜透析效能的下降，最終出現(xiàn)超濾衰竭(Ultrafiltration failure，UFF)，這成為長(zhǎng)期腹膜透析患者退出治療的主要原因。已有相關(guān)文獻(xiàn)證實(shí)，經(jīng)典活化型巨噬細(xì)胞(M1)參與炎癥的反應(yīng)以及病菌的清除，替代性活化的巨噬細(xì)胞(M2)參與組織重塑和纖維化的發(fā)生但M1型巨噬細(xì)胞在腹膜透析(PD)相關(guān)性腹膜纖維化中的效果尚未闡明。鋅離子作為一種機(jī)體不可缺少的微量元素，在代謝的穩(wěn)態(tài)平衡中起到至關(guān)重要的作用，已有證據(jù)表明，鋅

3、離子的缺乏可引起肺組織，肝組織的纖維化改變。而近期的研究也發(fā)現(xiàn)透析患者有著不同程度的鋅缺乏。據(jù)此，我們?cè)O(shè)想不同濃度的鋅離子可能影響巨噬細(xì)胞的極化而調(diào)控腹透相關(guān)性腹膜纖維化的進(jìn)程。
　　目的：觀察4.25％含糖腹透液及不同濃度的鋅離子誘導(dǎo)的大鼠腹膜纖維化模型中纖維化相關(guān)標(biāo)志物CollagenⅠ、α-SMA表達(dá)的變化;巨噬細(xì)胞極化標(biāo)志物CCR7、CD206及F4/80的表達(dá)分布;巨噬細(xì)胞極化標(biāo)志物IL-1β、CCL22表達(dá)的變化。

4、r>　　方法：清潔級(jí)SD雄性大鼠24只隨機(jī)分為4組，實(shí)驗(yàn)周期為7天:生理鹽水組(n=6):每日按100ml/kg向腹腔內(nèi)注射0.9％生理鹽水;高糖組(n=6):每日按100ml/kg向腹腔內(nèi)注射4.25％的含糖透析液;硫酸鋅低濃度組(n=6):按100ml/kg體重給予每日腹腔注射4.25％含糖透析液加入硫酸鋅3.9mg/kg;硫酸鋅高濃度組(n=6):按100ml/kg體重給予每日腹腔注射4.25％含糖透析液加入硫酸鋅15.5mg/k

5、g。7天后檢殺大鼠并取材，留取壁層腹膜組織行HE染色及免疫熒光等檢測(cè)，臟層腹膜組織行Westemblot及ELISA等檢測(cè)。
　　結(jié)果：壁層腹膜HE染色光鏡下觀察:生理鹽水組:腹膜較薄，覆蓋一層線性扁平間皮細(xì)胞，大網(wǎng)膜幾乎無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，間皮下基質(zhì)較少，僅有少量纖維組織沉積;高糖持續(xù)刺激7天后，腹膜間皮細(xì)胞多保持在扁平狀，細(xì)胞下基質(zhì)增厚，少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);硫酸鋅低濃度組第7天腹膜炎增強(qiáng)，腹膜間皮細(xì)胞呈扁平狀，部分脫落，腹膜表面可見(jiàn)

6、炎性細(xì)胞浸潤(rùn);硫酸鋅高濃度組第7天腹膜炎癥明顯增強(qiáng)，腹膜間皮細(xì)胞呈扁平狀，間皮下基質(zhì)增厚，間質(zhì)炎癥細(xì)胞增多，腹膜表面有大量單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。western blot結(jié)果顯示在腹膜纖維化早期，生理鹽水組、高糖組、硫酸鋅低濃度組、硫酸鋅高濃度組，臟層腹膜組織中均有α-SMA、collagen I的表達(dá);高糖對(duì)照組、硫酸鋅低濃度組、硫酸鋅高濃度組表達(dá)逐漸升高，說(shuō)明隨著鋅離子濃度的升高，纖維化程度逐漸升高。高糖組與生理鹽水組比較，硫酸鋅低濃度組

7、、硫酸鋅高濃度組分別與生理鹽水組比較，差異有意義，p＜0.05;免疫熒光測(cè)試的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為:在生理鹽水對(duì)照組中，巨噬細(xì)胞(F4/80)分布較少，M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物(CCR7)幾乎呈陰性，表達(dá)較少，M2型巨噬細(xì)胞(CD206)同樣表達(dá)較少，呈弱陽(yáng)性;在高糖對(duì)照組中，巨噬細(xì)胞(F4/80)表達(dá)稍增強(qiáng)，M1型巨噬細(xì)胞(CCR7)與M2型巨噬細(xì)胞(CD206)表達(dá)也增強(qiáng);在硫酸鋅低濃度組中，巨噬細(xì)胞(F4/80)表達(dá)增強(qiáng)，呈散點(diǎn)狀分布，介于高糖

8、組與硫酸鋅高濃度組之間，M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物(CCR7)與M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記物(CD206)表達(dá)分布也增強(qiáng)，呈陽(yáng)性;在硫酸鋅高濃度組中，M1型巨噬細(xì)胞(CCR7)表達(dá)較硫酸鋅低濃度組表達(dá)升高，M2型巨噬細(xì)胞(CD206)表達(dá)明顯增強(qiáng)，與巨噬細(xì)胞分布相吻合呈耀眼的強(qiáng)陽(yáng)性;ELISA檢測(cè)生理鹽水組、高糖組、硫酸鋅低濃度組、硫酸鋅高濃度組的大鼠臟層腹膜中均有巨噬細(xì)胞M1型、M2型極化分泌標(biāo)記物蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示，生理鹽水組、高糖組、硫酸鋅低

9、濃度組、硫酸鋅高濃度組中IL-1β、CCL22的表達(dá)程度逐漸升高，說(shuō)明在腹膜纖維化早期巨噬細(xì)胞M1型極化的程度逐漸升高，M2型巨噬細(xì)胞極化程度也逐漸升高，但M1型巨噬細(xì)胞極化占主要地位。
　　結(jié)論：⑴高糖刺激下巨噬細(xì)胞M1、M2型極化程度升高，在加入鋅離子后，隨著鋅離子濃度升高，巨噬細(xì)胞M1型、M2型極化也升高，但以M1型極化占主導(dǎo)；⑵高濃度的鋅離子會(huì)刺激巨噬細(xì)胞極化程度顯著升高，而低濃度的鋅離子較高濃度鋅離子會(huì)減弱巨噬細(xì)胞的極化