CaMKIIδ在兔心衰模型中對(duì)晚鈉通道的影響及其與AnkyrinG在心室肌細(xì)胞中的關(guān)聯(lián).pdf

1、目的：采用兔耳緣靜脈注射異丙腎上腺素（Isoprenaline，ISO）建立兔心力衰竭（hea rt fa ilure，HF）模型；探討HF時(shí)，兔心室肌細(xì)胞的晚鈉電流（ Late Sod ium Current，INaL）的變化及 KN-93（CaMKII抑制劑）對(duì) INaL的影響；同時(shí)檢測心室肌組織內(nèi)CaMKIIδ、磷酸化CaMKIIδ、Nav1.5、AnkyrinG的表達(dá)及CaMKIIδ和AnkyrinG定位情況；闡明HF時(shí)CaMK

2、IIδ可能通過AnkyrinG調(diào)控晚鈉通道，誘導(dǎo)心律失常的產(chǎn)生。
　　方法：實(shí)驗(yàn)用日本大耳白兔，雌雄不拘，隨機(jī)分為 HF組和對(duì)照組（每組12只）。HF組兔經(jīng)耳緣靜脈注射ISO（300μg·kg-1·d-1），連續(xù)注射15天；對(duì)照組兔經(jīng)耳緣靜脈注射等體積0.9％生理鹽水（1ml·kg-1·d-1），連續(xù)注射15天；注射完成后，均自由進(jìn)食給水。（1）建立模型1月后進(jìn)行超聲心動(dòng)圖檢查、ELISA法檢測兔血漿BN P含量、H E染色觀察心

3、肌病理改變等來評(píng)價(jià)HF模型是否建立成功；（2）分離對(duì)照組和HF組兔心室肌細(xì)胞，采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄INaL；（3）通過Western blotting檢測CaMKIIδ、磷酸化CaMKIIδ、Nav1.5及AnkyrinG的表達(dá)；（4）qRT-PCR檢測CaMKIIδ、Nav1.5及AnkyrinGmRNA表達(dá)；（5）石蠟切片免疫熒光雙標(biāo)法標(biāo)記CaMKIIδ和AnkyrinG，觀察其定位情況。
　　結(jié)果：1）造模一般結(jié)果：HF

4、組兔在注射ISO造模過程中死亡3只、對(duì)照組兔無死亡，建立模型成功率為75.0%；與對(duì)照組相比， HF組兔的心率增加較明顯（P<0.01）。2）心臟超聲結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比較，HF組心室腔增大、心功能降低；HF組LVEF（46.52±7.18%）較對(duì)照組（65.52±4.09%）明顯下降且小于50%（P<0.01）；HF組LVFS（21.14±3.70%）較對(duì)照組（32.58±2.84%）明顯下降（P<0.01）。3）兔血漿BNP含量結(jié)

5、果：HF組血漿BNP含量（391.40±38.59pg/ml）較對(duì)照組（234.49±31.68pg/ml）明顯增加（P<0.01）。4）HE染色顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：對(duì)照組心室肌細(xì)胞呈長梭形、排列整齊，細(xì)胞之間的界限清楚，可見心肌橫紋；HF組心室肌細(xì)胞排列紊亂、無規(guī)則，可見心室肌細(xì)胞呈空泡樣變性及心室肌細(xì)胞間質(zhì)水腫、纖維組織增多。5）全細(xì)胞膜片鉗發(fā)現(xiàn)：HF組的INaL（-1.64±0.30pA/pF）與對(duì)照組（-0.70±0.17pA/p

6、F）相比明顯增加（P<0.01）；分別加入30nM ATXII（INaL激動(dòng)劑）后，HF組中ATXII組與空白對(duì)照相比INaL明顯增加、對(duì)照組中ATXII組INaL也明顯增高，并且HF組比對(duì)照組增加更明顯（P<0.01）；在ATXII誘導(dǎo)電流增加穩(wěn)定后，分別加入1μM KN-93（CaMKII抑制劑）后，對(duì)照組中經(jīng)ATXII誘導(dǎo)增加的INaL由（-1.39±0.29pA/pF）減少至（-0.99±0.28pA/pF），且P<0.05、H

7、F組中經(jīng)ATXII誘導(dǎo)增加的INaL由（-2.27±0.22pA/pF）減少至（-1.87±0.25pA/pF），且P<0.01。6）Western blotting結(jié)果示：HF組的心室肌組織CaMKIIδ、磷酸化CaMKIIδ、Nav1.5及AnkyrinG蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比均明顯增加（ P<0.01）。7） q RT-PCR結(jié)果顯示：HF組中CaMKIIδ、Nav1.5和AnkyrinG mRNA表達(dá)量明顯高于對(duì)照組（P<0.01

8、）。8）免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果示：對(duì)照組和HF組均有綠色及紅色熒光，且HF組的綠色及紅色熒光與對(duì)照組相比熒光更強(qiáng)；對(duì)照組和HF組的綠色及紅色熒光均分布在細(xì)胞內(nèi)，兩者在細(xì)胞膜上的同一部位表達(dá)更明顯，這表明CaMKIIδ和AnkyrinG共同表達(dá)在細(xì)胞膜上。
　　結(jié)論：1、異丙腎上腺素誘導(dǎo)的兔HF中，不僅Nav1.5表達(dá)上調(diào)，而且INaL也會(huì)增大。2、HF時(shí)，CaMKIIδ表達(dá)及活性增加，且使用CaMKII的抑制劑KN-93能減少INaL，