辛伐他汀對(duì)兔缺血再灌注后左心室肌細(xì)胞離子通道活性的影響.pdf

1、目的：經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（PCI）技術(shù)，是急性心肌梗死治療史上里程碑式的進(jìn)步，然而隨之帶來的再灌注損傷直接影響到患者的預(yù)后。心肌缺血后發(fā)生再灌注可產(chǎn)生再灌注心律失常，特別是室速、室顫是導(dǎo)致心源性猝死的主要危險(xiǎn)因素，約占心血管死亡事件的50％左右。因而缺血再灌注（I-R）心律失常是目前的研究熱點(diǎn)之一。近年來研究表明他汀治療有抗心律失常作用，但機(jī)制尚不明確。本研究以酶解法分離兔I-R后左心室肌細(xì)胞，應(yīng)用膜片鉗全細(xì)胞記錄方法，研究I-R后梗

2、死區(qū)和非梗死區(qū)心肌細(xì)胞鈉通道電流（INa）、L型鈣通道電流（ICa-L）、瞬間外向鉀電流（Ito）活性的變化及辛伐他汀對(duì)各通道電流的影響，探討辛伐他汀抗心律失常的離子機(jī)制。
　　 材料與方法：
　　 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：新西蘭純種大耳白兔45只，從河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購買，雌雄不拘，體重2.0～2.5kg。隨機(jī)分為三組：假手術(shù)對(duì)照組，I-R組和他汀組。
　　 2.模型制作：采用開胸結(jié)扎兔冠狀動(dòng)脈左前降支，30分鐘后

3、，放松結(jié)扎線后再灌注120 min的方法建立急性I-R模型。他汀組術(shù)前給予辛伐他?。? mg·kg-1·d-1），口服3天，I-R組和假手術(shù)對(duì)照組術(shù)前給予安慰劑口服3天，其中假手術(shù)對(duì)照組開胸后分離冠狀動(dòng)脈左前降支，并不結(jié)扎血管。在組織病理學(xué)染色中，急性I-R模型的缺血時(shí)間為3小時(shí)，再灌注時(shí)間為60 min。
　　 3.心律失常評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：（1）0分，無心律失常；（2）1分，偶發(fā)性室性早搏；（3）2分，頻發(fā)性室性早搏；（4）3分，偶

4、發(fā)性室性心動(dòng)過速；（5）4分，頻發(fā)性室性心動(dòng)過速；（6）5分，頻發(fā)性室顫。
　　 4.細(xì)胞分離：利用酶解（膠原酶，Sigma公司）的方法分離心室肌細(xì)胞，梗死區(qū)細(xì)胞（指梗死區(qū)周圍存活細(xì)胞）來源于心臟冠狀動(dòng)脈左前降支毗鄰的左心室前壁梗死區(qū)部位，非梗死區(qū)為左心室游離壁與心梗區(qū)相對(duì)應(yīng)區(qū)域，正常對(duì)照組細(xì)胞則取自正常兔心室與梗死區(qū)相對(duì)應(yīng)的部位。
　　 5.電流記錄：應(yīng)用膜片鉗全細(xì)胞記錄方法，記錄他汀組和I-R組梗死區(qū)和非梗死區(qū)心肌細(xì)

5、胞INa、ICa-L和Ito活性的變化，并與假手術(shù)對(duì)照組進(jìn)行比較分析。電流記錄的刺激程序由pulse+pulsefit軟件控制，通道信號(hào)經(jīng)EPC-9膜片鉗放大器放大，通過Ag-AgCl電極絲和填充電極內(nèi)液的微電極導(dǎo)入細(xì)胞，產(chǎn)生的電流信號(hào)經(jīng)EPC-9轉(zhuǎn)換，為pulse+pulsefit軟件采集、分析，采集的數(shù)據(jù)用Origin 7.5擬合。
　　 6.組織病理學(xué)研究：心肌梗塞面積TTC染色并比較各組梗死區(qū)占橫斷面積的百分比。

6、　　 7.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)量數(shù)據(jù)以x±s表示，組間均數(shù)比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用四格表的Fisher確切概率法。所有數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以P<0.05作為顯著性差異的指標(biāo)。
　　 結(jié)果:
　　 1.辛伐他汀對(duì)I-R中心律失常的影響。
　　 假手術(shù)對(duì)照組在觀察期內(nèi)僅偶爾出現(xiàn)室性早搏，未發(fā)生室性心動(dòng)過速（室速）和心室顫動(dòng)（室顫）。I-R組在心肌缺血時(shí)，心電圖ST段明顯抬高，可出現(xiàn)室

7、性早搏（室早）、室速和室顫等心律失常；在再灌注即刻，出現(xiàn)較為嚴(yán)重的室速和室顫，此后隨著再灌注時(shí)間的延長，兔心電圖ST段明顯恢復(fù)，心肌缺血改善，心律失常（室速、室顫）的發(fā)生減少。與對(duì)照組比較，I-R組心律失常的評(píng)分明顯增加（P<0.01）。辛伐他汀組兔在I-R期間，也可出現(xiàn)室早、室速（但無室顫）等心律失常，與I-R組相比，其持續(xù)時(shí)間明顯縮短，發(fā)生率及心律失常評(píng)分明顯降低（P<0.01）。
　　 2.辛伐他汀對(duì)離子通道電流的影響。<

8、br>　　 2.1 I-R組和辛伐他汀組在梗死區(qū)與非梗死區(qū)之間的INa電流密度峰值的比較。
　　 2.2 辛伐他汀對(duì)梗死區(qū)心肌INa的影響。
　　 2.2.1 辛伐他汀對(duì)INa及I-V曲線的影響。
　　 他汀組與對(duì)照組相比，無明顯差異（P>0.05）。I/R可導(dǎo)致INa明顯下降，辛伐他汀治療可逆轉(zhuǎn)這種變化。
　　 2.2.2 辛伐他汀對(duì)INa穩(wěn)態(tài)失活曲線的影響。
　　 對(duì)照組，I-R組及辛伐他汀

9、組的失活曲線斜率K（mV）分別為8.25±0.42 mV（n=16），8.71±0.36 mV（n=12），9.11±0.64mV（n=15），三組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 2.2.3 辛伐他汀對(duì)INa失活后再恢復(fù)曲線的影響。
　　 他汀組與對(duì)照組相比，無明顯差異（P>0.05）。缺血再灌注可導(dǎo)致INa失活后再恢復(fù)時(shí)間延長，辛伐他汀治療可逆轉(zhuǎn)這種變化。
　　 2.3 辛伐他汀對(duì)梗死區(qū)心肌ICa-

10、L的影響。
　　 2.3.1 辛伐他汀對(duì)ICa-L及I-V曲線的影響。
　　 他汀組與對(duì)照組相比，無明顯差異（P>0.05）。缺血再灌注可導(dǎo)致ICa-L明顯升高，辛伐他汀治療可逆轉(zhuǎn)這種變化。
　　 2.3.2 辛伐他汀對(duì)ICa-L穩(wěn)態(tài)失活曲線的影響。
　　 ICa-L穩(wěn)態(tài)失活曲線斜率K（mV）：對(duì)照組為6.34±0.80 mV（n=16），I-R組為11.42±0.75mV（n=15），與對(duì)照組相比明顯增

11、加（P<0.01）；辛伐他汀組k為10.67+0.68mv（n=13），與對(duì)照組比較顯著增大（P<0.01），但和I-R組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 2.4 辛伐他汀對(duì)梗死區(qū)心肌Ito的影響。
　　 2.4.1 辛伐他汀對(duì)Ito及I-V曲線的影響。
　　 Ito電流密度（+60 mV時(shí)）的對(duì)比顯示：對(duì)照組為17.41±3.13（n=15），I-R組為9.49±1.91（n=11），與對(duì)照組相比顯著下

12、降（P<0.01）。他汀組為14.54±2.41（n=11），與I-R組相比顯著升高（P<0.01），但仍明顯小于對(duì)照組，（P<0.05）。缺血再灌注可導(dǎo)致Ito明顯下降，辛伐他汀治療可在一定程度上逆轉(zhuǎn)這種變化。
　　 2.4.2 辛伐他汀對(duì)Ito穩(wěn)態(tài)失活曲線的影響。
　　 對(duì)照組，I-R組及辛伐他汀組Ito穩(wěn)態(tài)失活曲線斜率K（mV）分別為：為16.73±1.46mV（n=15），16.3 1±1.07 mV（n=11）

13、，17.05±1.58mV（n=11），三組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 3.各組病理TTC染色結(jié)果。
　　 各組病理中梗死區(qū)所占橫斷面積的百分比：I-R組、格列苯脲-他汀組、他汀組分別為（28.17+2.31）％（n=5），（17.16+0.35）％（n=5），（5.34+0.72）％（n=5）；I-R組較格列苯脲-他汀組明顯增加（P<0.01），他汀組和其它兩組比較明顯減少（P<0.01）。缺血再灌注可

14、導(dǎo)致心肌壞死，辛伐他汀治療可保護(hù)缺血區(qū)心肌。
　　 結(jié)論：
　　 1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明他汀類藥物明顯降低缺血再灌注心律失常的發(fā)生率。
　　 2.缺血再灌注可導(dǎo)致缺血心肌細(xì)胞INa和Ito明顯下降，ICa-L明顯增加，形成電重構(gòu)，可引起心肌細(xì)胞動(dòng)作電位延長，并且不同區(qū)域之間存在電生理異質(zhì)性，為再灌注心律失常發(fā)生的機(jī)制。辛伐他汀預(yù)治療可減輕這些離子通道的異常變化，逆轉(zhuǎn)電重構(gòu)，而不依賴于其降血脂效應(yīng)，可能為他汀類藥物降低心