大豆異黃酮抗疲勞作用及相關(guān)機制的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  1.應(yīng)用建立的小鼠負(fù)重游泳動物模型,觀察補充大豆異黃酮對小鼠游泳耐力的作用(抗疲勞的作用),確定大豆異黃酮抗疲勞作用的劑量效應(yīng)關(guān)系。
  2.研究補充大豆異黃酮對負(fù)重游泳小鼠能量代謝、抗氧化功能方面的作用,探討大豆異黃酮抗疲勞作用機制。
  方法:
  1.選用雄性昆明小鼠40只,根據(jù)體重隨機分為4組,每組10只小鼠,以AIN-93M飼料喂養(yǎng)小鼠14d,2%負(fù)重游泳0(正常組)、30、60、120 m

2、in,采用血清生化分析方法和1H NMR代謝組學(xué)技術(shù),分析小鼠負(fù)重游泳過程中血清某些疲勞標(biāo)志物的變化,確定適宜的游泳時間和可敏感反映機體疲勞狀況的指標(biāo),作為機體的疲勞生物標(biāo)志物,并以此為切入點,展開進(jìn)一步的研究。
  2.選用雄性昆明小鼠40只,根據(jù)體重隨機分為4組:分別記為對照組、實驗SI1組、2組、3組,每組10只小鼠,對照組小鼠喂以AIN-93M合成飼料,實驗組小鼠在正常飼料基礎(chǔ)上每千克飼料中補充添加2g、4g、8g的大豆異

3、黃酮,喂養(yǎng)14d之后,四組小鼠分別按體重2%負(fù)重游泳至力竭,觀察各組小鼠游泳耐力情況,比較各組小鼠的游泳力竭時間,確定大豆異黃酮抗疲勞作用的劑量效應(yīng)關(guān)系。
  3.選用雄性昆明小鼠30只,根據(jù)體重隨機分為3組:分別記為正常組、對照組和SI0.4組,正常組、對照組喂以AIN-93M合成飼料,SI0.4組喂以在此基礎(chǔ)上補充4g/kg的大豆異黃酮飼料,喂養(yǎng)14d,對照組和SI0.4組小鼠按2%體重負(fù)重游泳60min,然后斷頭處死所有小鼠

4、,取血分離血清,取肝臟、大腿骨骼肌,分別測定血糖、血乳酸、血清尿素氮含量(BUN),血清和肝臟、骨骼肌中游離脂肪酸含量(NEFA)、肝糖元、肌糖元含量,肝臟、骨骼肌中琥珀酸脫氫酶(SDH)、ATP酶、肌酸激酶(CK)活性,血清和肝臟、骨骼肌谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化物酶(SOD)活性等抗氧化功能相關(guān)指標(biāo)。
  4.選用雄性昆明小鼠30只,根據(jù)體重隨機分為3組:分別記為正常組、對照組、和SI0

5、.4組,正常組、對照組喂以AIN-93M合成飼料,SI04組喂以在此基礎(chǔ)上補充4g/kg的大豆異黃酮飼料,喂養(yǎng)14d,對照組和SI0.4組小鼠按2%體重負(fù)重游泳60min,然后斷頭處死所有小鼠,差速離心法分離骨骼肌線粒體,測定線粒體呼吸鏈酶復(fù)合體功能、膜流動性、膜電位、呼吸功能、通透性轉(zhuǎn)換孔開放(腫脹率)、ATP酶活性等線粒體功能指標(biāo)以及T-AOC、GSH-Px、SOD、MDA等抗氧化功能指標(biāo)。
  結(jié)果:
  1.血清代謝

6、組學(xué)實驗數(shù)據(jù)表明:隨著負(fù)重游泳時間的延長,小鼠血清代謝出現(xiàn)規(guī)律性變化,主要表現(xiàn)在乳酸、尿素氮和脂類相關(guān)代謝產(chǎn)物增加,血糖降低。血清生化分析結(jié)果與代謝組學(xué)結(jié)果有較好的一致性,變化規(guī)律基本相同。與正常組相比,小鼠負(fù)重游泳60min血清代謝變化比較明顯,并且數(shù)據(jù)離散趨勢要小于120min,適合作為下一步實驗研究的觀察時間,因此下一步實驗將游泳時間確定為60min。
  2.補充大豆異黃酮對小鼠負(fù)重游泳耐力的影響:正常組小鼠游泳力竭時間為

7、75.5min,飼料中補充2g/kg劑量組游泳力竭時間是85.6min,補充4g/kg劑量組游泳力竭時間是105.8min,補充8g/kg劑量組游泳力竭時間是88.1min,可見飼料中補充4g/kg劑量大豆異黃酮組的小鼠游泳力竭時間最長,抗疲勞效果在3個劑量組中相對最好,因此下一步實驗將大豆異黃酮的添加量確定為4g/kg飼料。
  3.補充大豆異黃酮對游泳小鼠能量代謝及抗氧化功能產(chǎn)生顯著影響。對照組小鼠負(fù)重游泳后,血乳酸含量較正常

8、組顯著升高,補充大豆異黃酮組小鼠較正常組有所升高,但與游泳對照組比較,卻顯著降低。小鼠負(fù)重游泳后BUN水平也顯著升高,補充大豆異黃酮使其顯著降低;補充大豆異黃酮后,小鼠血清和肝、骨骼肌組織中游離脂肪酸含量顯著升高,說明在大豆異黃酮的調(diào)控作用下,使得小鼠運動過程中能源物質(zhì)來源構(gòu)成發(fā)生明顯改變,可能是通過減少蛋白質(zhì)或氨基酸的消耗,增加脂肪的動員和利用的途徑,為機體提供能量,這對于提高機體運動耐力具有重要意義。另外補充大豆異黃酮還可提高肝臟組

9、織SDH活性和肝臟、骨骼肌組織CK、ATP酶活性,說明大豆異黃酮可能對三羧酸循環(huán)具有調(diào)節(jié)作用,增加了運動過程中機體能量的供給,有助于延緩疲勞的發(fā)生。此外補充大豆異黃酮還可降低骨骼肌中氧化應(yīng)激產(chǎn)物MDA的含量,提高骨骼肌和肝臟組織中的T-AOC、SOD、GSH-Px活性,這對于減輕運動所致氧化應(yīng)激損傷是十分有利的。
  4.補充大豆異黃酮對游泳小鼠骨骼肌線粒體功能具有保護(hù)作用。小鼠負(fù)重游泳后骨骼肌線粒體呼吸鏈酶復(fù)合體活性、線粒體膜電

10、位和膜流動性都有不同程度的下降,影響了線粒體的正常生理功能,能量合成可能會有所下降,機體供能受到一定影響,補充大豆異黃酮后又有所恢復(fù),改善了線粒體的功能,有利于機體運動過程的能量的供給。小鼠負(fù)重游泳后骨骼肌線粒體ATP酶活性顯著降低,補充大豆異黃酮又有一定程度的改善,說明大豆異黃酮對運動過程中骨骼肌線粒體能量代謝具有某種調(diào)節(jié)作用,有利于ATP的合成,提高機體運動耐力,延緩疲勞的發(fā)生。與對照組相比,補充大豆異黃酮后,小鼠運動后骨骼肌線粒體

11、中T-AOC、SOD、GSH-Px都有不同水平的提高,MDA含量降低,表明線粒體抗氧化損傷的能力增強,氧化損傷產(chǎn)物的生成減少,有利于減輕運動過程中的氧化應(yīng)激損傷。通過調(diào)節(jié)線粒體功能和提高線粒體的抗氧化應(yīng)激損傷能力這可能是其發(fā)揮抗疲勞作用的重要機制。
  結(jié)論:
  本研究采用的雄性昆明小鼠建立負(fù)重游泳模型,應(yīng)用此模型觀察了大豆異黃酮抗疲勞作用和可能的代謝機制,可以較好反映一般運動過程機體能量代謝的特點,對于普通大眾人群疲勞的

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