克里米亞—?jiǎng)偣鲅獰岵《?CCHFV)核蛋白的表達(dá)純化、結(jié)晶、結(jié)構(gòu)及功能分析.pdf

1、克里米亞-剛果出血熱(CCHF)是一種致死率達(dá)30％-50％的蜱傳播的傳染病，在世界各地廣泛流行，已經(jīng)在非洲、歐洲、亞洲等的30多個(gè)國家和地區(qū)都有報(bào)道。1965年我國首位病例出現(xiàn)在新疆巴楚縣，也稱為新疆出血熱，致死率高達(dá)80％，主要集中于我國的西南和西北地區(qū)。克里米亞-剛果出血熱主要有兩種感染途徑:一是通過蜱類直接叮咬，二是通過皮膚傷口感染。臨床癥狀一般為發(fā)熱、頭痛、嘔吐、出血、肝腎衰竭等。目前沒有有效的治療手段。該病是由于感染克里米亞

2、-剛果出血熱病毒(CCHFV)引起的，CCHFV是負(fù)鏈RNA病毒，屬于布尼亞病毒科內(nèi)羅病毒屬，基因組RNA包括L、M、S三段，分別編碼RNA聚合酶、糖蛋白和核蛋白(NP)。該病毒的傳播性強(qiáng)，被認(rèn)為有被恐怖分子利用的危險(xiǎn)，CCHFV已被列為生物安全四級(jí)病原體(BSL-4)。迄今為止，針對(duì)CCHFV的基礎(chǔ)研究還很缺乏。
　　 CCHFV核蛋白(NP)結(jié)合病毒的基因組RNA，形成核蛋白-RNA復(fù)合物(RNP)，能參與病毒RNA復(fù)制、衣

3、殼化及病毒粒子裝配等重要過程。病毒的核蛋白還能與病毒蛋白及宿主細(xì)胞內(nèi)蛋白發(fā)生相互作用來保護(hù)自身干擾細(xì)胞正常功能。
　　 本論文以CCHFV NP為研究對(duì)象，對(duì)核蛋白進(jìn)行表達(dá)、純化、結(jié)晶等工作。首先將核蛋白的全長基因構(gòu)建到原核表達(dá)載體，在大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)目的蛋白，進(jìn)一步純化，通過大量結(jié)晶條件的篩選獲得該蛋白的晶體。利用X-ray衍射收集了2.3(A)的衍射數(shù)據(jù)，解析晶體結(jié)構(gòu)。與其他報(bào)道的負(fù)鏈RNA病毒核蛋白結(jié)構(gòu)不同，CCHFV N