剛果出血熱病毒核蛋白復(fù)合體組裝機(jī)制的研究.pdf

1、克里米亞-剛果出血熱（Crimean–Congo haemorrhagic fever，CCHF）是一類嚴(yán)重的蜱蟲傳播疾病，病原體是克里米亞-剛果出血熱病毒（Crimean–Congo haemorrhagic fever virus, CCHFV），在非洲，亞洲，歐洲東部及中東地區(qū)均有分布?？死锩讈?剛果出血熱病毒具有很強(qiáng)的傳染能力，通過蜱蟲叮咬，與帶有病原體的病人接觸以及接觸攜帶病原體生物的血液、組織等途徑均能感染該病毒。由于克里米

2、亞-剛果出血熱傳播地域廣泛，致死率高，嚴(yán)重危害人類公共健康安全，擔(dān)心被用作生物武器等，使得對(duì)克里米亞-剛果出血熱病毒的研究變得尤為重要。
　　CCHFV是有包膜的反義單鏈RNA病毒，屬于布尼亞病毒科，內(nèi)羅病毒屬。CCHFV基因組包括三個(gè)單股負(fù)鏈RNA片段，稱為大（L）、中（M）和?。⊿）片段。L片段編碼一個(gè)RNA依賴的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp），M片段編碼一個(gè)糖蛋白前體，進(jìn)而

3、加工產(chǎn)生兩個(gè)糖蛋白Gn和Gc（glycoprotein Gn and Gc），S片段編碼一個(gè)核蛋白（nucleocapsid protein， NP）。NP蛋白包裹基因組 RNA，與 RdRp一起形成核糖核蛋白復(fù)合體（ribonucleoproteincomplex, RNP），由于基因組RNA只有以RNP形式存在時(shí)才能完成復(fù)制與轉(zhuǎn)錄過程，因此RNP在CCHFV的生活周期中起到核心作用。
　　我們首先分離出CCHFV NP-RNA

4、復(fù)合體，并進(jìn)一步確認(rèn)分離出的NP蛋白為寡聚體并結(jié)合有核酸，通過電鏡三維重構(gòu)方法得到一個(gè)環(huán)形三維重構(gòu)模型，并進(jìn)一步與CCHFV NP的晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行了docking模型搭建。在CCHFV NP-RNA復(fù)合體中， NP單體蛋白采用首尾相連的方式按順時(shí)針方向相互作用，完成CCHFV NP蛋白的多聚化。同時(shí)表明NP蛋白的head與stalk結(jié)構(gòu)域可能共同參與了NP與RNA的相互作用。本研究揭示了CCHFV NP-RNA復(fù)合體的組裝機(jī)制，將有助于針