2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp),是弧菌科(Vibrio)弧菌屬的桿菌或多形態(tài)的革蘭氏陰性菌,具嗜鹽性,廣泛存在于海洋以及河口環(huán)境,通過食品傳播,是遍布世界的食源性致病菌,人多因食用被本菌污染的生的或未煮熟的海鮮而引起急性胃腸炎發(fā)生食物中毒。我國每年都有副溶血性弧菌引起食物中毒的報道,且在食源性致病引發(fā)的食物中毒病例中占首要位置,快速檢測和流行病學(xué)調(diào)查有助于該病的控制。
  傳統(tǒng)檢測方法存在操作

2、繁瑣、檢測周期長、成本高等問題,促使以檢測特異靶基因為目標(biāo)的分子檢測技術(shù)快速發(fā)展。目前PCR檢測方法大多基于毒力基因或看家基因,存在假陽性和漏檢的風(fēng)險,建立敏感而特異的快速分子檢測方法迫在眉睫。本文在對toxRS序列進行系統(tǒng)發(fā)育及同源性分析的基礎(chǔ)上,發(fā)現(xiàn)toxR、toxS均有作為種特異性檢測靶基因的可能,故分別設(shè)計引物primers-R、primers-S及primers-R-S,優(yōu)化PCR反應(yīng)條件建立相應(yīng)PCR方法,通過對57株副溶血

3、性弧菌和19株親緣相近菌及食源性致病菌的檢測,toxR-SPCR顯示出較好的穩(wěn)定性和特異性,檢測極限達2pg基因組DNA。toxR-SPCR方法進一步與國標(biāo)方法對比驗證,通過對359份市場海產(chǎn)品檢測,符合率高達95.82%,敏感性100%,特異性92.39%。對兩種方法檢測陽性差異的15份樣品,以其總細菌DNA為模板擴增副溶血性弧菌看家基因,測序比對顯示與副溶血性弧菌同源性高達97%以上。表明所建立的方法具有快速、特異、敏感等優(yōu)點,可廣

4、泛用于副溶血弧菌的快速檢測。
  現(xiàn)已有對江蘇周邊、舟山、上海等地區(qū)副溶血性弧菌分子流行病學(xué)的報道,但缺乏對華東區(qū)域整體的調(diào)查分析,而華東地區(qū)4省1市臨海,是副溶血性弧菌污染的“重災(zāi)區(qū)”,加強對該區(qū)域毒力相關(guān)基因的分子流行病學(xué)方面的調(diào)查分析,對防控副溶血性弧菌的大流行性爆發(fā)有重要意義。本文對華東地區(qū)分離到的Vp進行大流行相關(guān)毒力基因的檢測和多位點序列分型(MLST)。152株分離株共檢出4株致病株(tdh+或trh+),其中2株為

5、可能形成大流行的菌株(tdh+和toxRS/new+)。MTase檢出率為1.3%,所有分離株不攜帶完整的Ⅲ型分泌系統(tǒng),78.3%的分離株攜帶全套的Ⅵ型分泌系統(tǒng)。152株Vp分為84個STs,其中新的STs有69個。聚類分析表明一部分環(huán)境分離株與臨床致病株看家基因進化關(guān)系相近,同種類宿主分離株的STs更有可能生成聚類關(guān)系,此外,歸屬于同源復(fù)合體CC3并非致病株的必要條件。以系統(tǒng)發(fā)育分析為基礎(chǔ),對毒力基因分布圖及宿主來源進行歸類,發(fā)現(xiàn)環(huán)境

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