大鼠應(yīng)激性心肌病神經(jīng)肽Y和PGC-1α表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、應(yīng)激性心肌病由應(yīng)激導(dǎo)致的一種急性心肌功能障礙，常因緊張、情感等神經(jīng)源性因素所激發(fā)。目前被認(rèn)為是猝死發(fā)生的原因之一。應(yīng)激性心肌病在日本被稱為Tako-Tsubo心肌病，破裂心臟綜合征和左室心尖球囊擴(kuò)張綜合癥，臨床上該病心電圖檢查示心肌缺血，血液中兒茶酚胺水平增高，超聲檢查可見左室球囊擴(kuò)張，節(jié)段性室壁運(yùn)動(dòng)異常，但冠狀動(dòng)脈造影卻往往不能發(fā)現(xiàn)有血流動(dòng)力學(xué)改變的冠狀動(dòng)脈狹窄性疾病存在。此類疾病由于發(fā)病急驟，往往不能得到及時(shí)的臨床救治而猝死，也沒有

2、相應(yīng)的臨床資料。目前，臨床及法醫(yī)病理學(xué)診斷都極大的依賴病史，大體解剖所見和顯微病理形態(tài)學(xué)改變。但多數(shù)病例由于缺乏相應(yīng)的臨床資料和尸體存在死后改變而給診斷帶來困難，從而引起糾紛。因此，探討一種新的方法能檢測(cè)心肌的應(yīng)激性改變，并能應(yīng)用于死后心肌組織的檢測(cè)，將具有重要的法醫(yī)學(xué)意義。
　　 本研究根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，建立大鼠應(yīng)激性心肌病模型。在進(jìn)行常規(guī)病理組織學(xué)觀察的基礎(chǔ)上,應(yīng)用熒光免疫組織化學(xué)和計(jì)算機(jī)圖像分析方法檢測(cè)心肌組織內(nèi)神經(jīng)肽 Y(N

3、PY)的分布水平，應(yīng)用半定量RT-PCR方法檢測(cè)過氧化物增殖物活化受體γ輔激活因子-1α(PGC-1α)在心肌組織中的mRNA表達(dá)水平。探討以上兩種分子生物學(xué)指標(biāo)在應(yīng)激導(dǎo)致的心肌缺血性改變中的診斷價(jià)值，期望為今后此類疾病的病理診斷提供一種可靠的方法。
　　
　　 目的：
　　 建立大鼠應(yīng)激性心肌病模型，在常規(guī)病理組織學(xué)觀察基礎(chǔ)上，檢測(cè)神經(jīng)肽 Y和PGC-1αmRNA在大鼠心肌組織中的表達(dá)。
　　

4、>　　 方法：
　　 30只雄性SD大鼠（平均重量250g/只）隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組大鼠每天先置于玻璃箱內(nèi)固定30min，然后將大鼠移至電足休克籠內(nèi)進(jìn)行30min的足底電刺激。15d和20d后，分別取10只實(shí)驗(yàn)組大鼠和5只對(duì)照組大鼠處死。
　　 將心臟取出沖洗干凈后，置入10％甲醛溶液或液態(tài)氮（-70℃）中。心臟標(biāo)本經(jīng)固定后，常規(guī)取材進(jìn)行HE染色。冰凍切片進(jìn)行NPY免疫熒光染色，應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)對(duì)

5、神經(jīng)肽Y的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)用半定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)大鼠心肌中PGC-1αmRNA的表達(dá)，并對(duì)其表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)。
　　
　　 結(jié)果：
　　 實(shí)驗(yàn)組大鼠左心室出現(xiàn)收縮帶壞死，炎性細(xì)胞浸潤，心肌間質(zhì)水腫和局灶性纖維化，上述改變與應(yīng)激性心肌病的病理學(xué)變化一致。但25d處死大鼠收縮帶壞死程度比15d處死的大鼠重。無論是15d，還是25d實(shí)驗(yàn)組，與對(duì)照組相比，NPY和 PGC-1αmRNA表達(dá)均顯著增高，但25d實(shí)驗(yàn)

6、組的NPY表達(dá)要高于15d實(shí)驗(yàn)組，而PGC-1αmRNA在15d及25d兩組之間的表達(dá)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無明顯差異（NPY：P<0.01, PGC-1α：P＞0.05)。
　　
　　 結(jié)論：
　　 組織病理學(xué)檢查結(jié)果證實(shí)大鼠應(yīng)激性心肌病模型復(fù)制成功，實(shí)驗(yàn)組大鼠存在應(yīng)激性心肌病的病理形態(tài)學(xué)改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比較，應(yīng)激性心肌病大鼠心肌組織中NPY和PGC-1α均呈明顯高表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)這兩種分子標(biāo)記物可用于