PI3K-Nrf2通路在內(nèi)毒素休克兔腎損傷中的作用.pdf

1、腎臟是內(nèi)毒素休克（endotoxin shock，ES）最容易累及的器官之一，其機制不明，治療棘手，目前尚無理想的預(yù)防和治療途徑，因此，深入探討內(nèi)毒素休克腎損傷的機制，對預(yù)防和減輕急性腎損傷（acute kidney injury，AKI）以改善內(nèi)毒素休克預(yù)后有著十分重要的臨床意義。核因子E2相關(guān)因子-2/抗氧化反應(yīng)元件（NF-E2-related factor2/antioxidant response element，Nrf2/AR

2、E）通路是體內(nèi)重要抗氧化反應(yīng)通路，血紅素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）是Nrf2/ARE下游重要的抗氧化蛋白[1]。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，HO-1在內(nèi)毒素休克腎組織中表達上調(diào)，對腎功能具有一定的保護作用[2]?，F(xiàn)有研究認為，絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPK）、磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol3-kinase，PI3K）)、蛋白

3、激酶C（protein kinase C，PKC）等信號通路分子廣泛參與了Nrf2的活化和核轉(zhuǎn)位過程[3]。關(guān)于PI3K/Nrf2信號通路在兔內(nèi)毒素休克腎損傷中的作用，目前尚未見報道。
　　目的：探討磷脂酰肌醇-3激酶-NF-E2相關(guān)因子2信號傳導(dǎo)通路在內(nèi)毒素休克兔急性腎損傷中的作用。
　　方法：健康清潔級雄性新西蘭大白兔50只，體重1.5～2.0kg，隨機分為5組（n=10）：對照組（C組）、渥曼青霉素（wortmanni

4、n）組（W組）、二甲基亞砜（dimthyl sulfoxide，DMSO）組（D組）、內(nèi)毒素休克模型組（L組）和渥曼青霉素+內(nèi)毒素休克組（WL組）。實驗兔常規(guī)飼養(yǎng)一周，禁食24小時后用于實驗。采用耳緣靜脈注射20％烏拉坦（mg/L）5 ml/kg方法麻醉后，行氣管插管，保留自主呼吸；左側(cè)頸內(nèi)動脈置入24號套管針，通過壓力傳感器連接監(jiān)護儀，連續(xù)監(jiān)測動脈血壓。穩(wěn)定30分鐘后，W組、WL組經(jīng)兔耳緣靜脈注射渥曼青霉素0.6 mg/kg（溶劑為D

5、MSO0.08ml/kg），D組注射DMSO0.08ml/kg，C組、L組注射生理鹽水0.08ml/ kg。30分鐘后，L組、WL組靜脈注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）5mg/kg（溶于2ml生理鹽水），C組、W組和D組注射生理鹽水2ml。注射脂多糖（或生理鹽水）6小時后，經(jīng)頸內(nèi)動脈取血5ml，及時離心，留取血清，用于測定血清肌酐（creatinine，Cr）和血清尿素氮（urea nitrogen，BUN）濃

6、度；經(jīng)膀胱留取尿液5ml，用于測定尿α1-微球蛋白（urinaryα1- microglobulin，α1-MG）濃度；處死兔，留雙腎組織，右腎用10%福爾馬林溶液浸泡，蘇木素伊紅染色，用于觀察腎組織病理學改變，并進行腎損傷評分（histological scores of kindey，HSK）；左腎液氮速凍后-80℃保存，采用硫代巴比妥酸法測定腎組織丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量，黃嘌呤氧化酶法測定超氧化物岐化

7、酶（superoxide dismutase，SOD）活性，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）法檢測腎組織中Nrf2 mRNA及HO-1 mRNA基因的表達情況，蛋白印跡（Western blot）法檢測腎組織p-Akt蛋白、Nrf2總蛋白、Nrf2核蛋白及HO-1蛋白的表達水平。
　　結(jié)果：與C組、W組及D組比較，L組、WL組腎組織損

8、傷評分增加、MDA含量升高，血清BUN、血Cr及尿α1-MG濃度升高，腎組織SOD活性降低，Nrf2 mRNA及HO-1 mRNA基因表達上調(diào)，p-Akt蛋白、Nrf2總蛋白、Nrf2核蛋白及HO-1蛋白表達上調(diào)（P<0.05）；C組、D組及W組之間上述指標的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與L組比較，WL組腎組織損傷評分增加、MDA含量升高，血清BUN、血Cr及尿α1-MG濃度升高，腎組織SOD活性降低，Nrf2 mRNA及HO-1