FFJ-3抑制EGFR-PI3K-Akt-PKM2通路調(diào)控腫瘤細胞生長的研究.pdf

1、目的：初步探究大葉茜草素結(jié)構(gòu)修飾物FFJ-3體外抗腫瘤活性及機制。
　　方法：MTT法檢測FFJ-3對HepG2、MCF7、A549細胞增殖的抑制作用；Hoechst33342/PI雙染法檢測FFJ-3對HepG2、MCF7、A549細胞凋亡的影響。流式細胞術(shù)檢測FFJ-3對HepG2、A549細胞周期的影響；Western blot檢測FFJ-3對HepG2、MCF7、A549細胞中EGFR、p-EGFR，Akt、p-Akt，P

2、KM2蛋白表達；Western blot檢測PI3K抑制劑LY294002及Akt激活劑胰島素(Insulin)對MCF7細胞Akt、p-Akt及PKM2蛋白表達的影響；Real-time PCR檢測LY294002及Insulin對MCF7細胞PKM2 mRNA水平的影響；羅丹明123(Rhodamine123,Rh123)染色檢測HepG2、MCF7、A549細胞線粒體膜電位水平；Western blot檢測FFJ-3對HepG2、

3、MCF7、A549細胞中Bcl-2、Bax、PARP、Cleaved PARP、Caspase3、Cleaved Caspase3等凋亡相關(guān)蛋白表達的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）MTT結(jié)果顯示FFJ-3呈濃度依賴性抑制HepG2、MCF7、A549細胞生長。FFJ-3對HepG2、MCF7、A549細胞的IC50值分別為26.46±0.20μmol?L-1、26.99±0.25μmol?L-1、33.93±3.74μmol

4、?L-1。
　?。?）Hochst33342/PI雙染法結(jié)果顯示FFJ-3能劑量依賴性地增加HepG2、MCF7、A549細胞的凋亡率，并呈現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)凋亡特征。
　?。?）流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示FFJ-3使HepG2細胞阻滯在G2/M期，使A549細胞阻滯在G1期。
　?。?）Western blot結(jié)果顯示FFJ-3能夠呈現(xiàn)劑量依賴性地下調(diào)EGFR、磷酸化EGFR，Akt、磷酸化Akt和PKM2蛋白的表達。

5、>　　（5）Western blot結(jié)果顯示LY294002能夠以時間和劑量依賴性關(guān)系上調(diào)Akt蛋白的表達、下調(diào)p-Akt與PKM2蛋白的表達；insulin能夠以時間和劑量依賴性關(guān)系下調(diào)Akt蛋白的表達、上調(diào)p-Akt和PKM2蛋白的表達。表明PI3K/Akt通路可調(diào)控PKM2蛋白表達。
　　（6）Real-time PCR結(jié)果顯示LY294002和Insulin對PKM2 mRNA的表達無明顯影響。
　　（7）羅丹明12

6、3染色結(jié)果顯示FFJ-3能夠呈劑量依賴性顯著降低HepG2、A549和MCF7細胞線粒體膜電位。
　?。?）Western blot結(jié)果顯示FFJ-3呈現(xiàn)劑量依賴性上調(diào)HepG2、MCF7、A549細胞中Cleaved PARP、Cleaved Caspase3、Bax蛋白的表達，下調(diào)Bcl-2蛋白表達。
　　結(jié)論：
　　（1）FFJ-3可明顯抑制腫瘤細胞生長。
　?。?）FFJ-3通過EGFR-PI3K/Akt