甘蔗離體培養(yǎng)的胚性細(xì)胞團(tuán)誘導(dǎo)與分化研究.pdf

1、本論文以桂糖21號(hào)(G21)、桂糖28(G28)、新臺(tái)糖22號(hào)(ROC22)和巴西固氮甘蔗RB86-7515(B8)四個(gè)甘蔗品種的嫩葉鞘進(jìn)行離體培養(yǎng),研究不同激素種類及組合對(duì)甘蔗愈傷組織及胚性細(xì)胞團(tuán)的誘導(dǎo)、繼代增殖、分化、生根的效應(yīng)。同時(shí),在離體培養(yǎng)過程中,對(duì)甘蔗愈傷組織和胚性細(xì)胞團(tuán)的顯微結(jié)果進(jìn)行觀察比較。主要試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1、甘蔗愈傷組織誘導(dǎo)試驗(yàn)結(jié)果:
　　 (1)甘蔗愈傷組織誘導(dǎo)率最佳的激素組合是:MS+2,

2、4-D3.0mg/L+NAA0.2mg/L+KT1.0mg/L。G21、G28、ROC22、B8的愈傷組織誘導(dǎo)率分別達(dá)到85.22％、79.21％、83.67％、78.63％。
　　 (2)MS比White、N6培養(yǎng)基更適合甘蔗外植體愈傷組織的誘導(dǎo)。
　　 (3)甘蔗外植體在誘導(dǎo)時(shí)加入5％椰子汁能提高愈傷組織誘導(dǎo)率,G21、G28、ROC22和B8的愈傷組織誘導(dǎo)率分別為87.33％,83.08％,84.13％和82.14

3、％。
　　 (4)添加丙氨酸能提高甘蔗外植體愈傷組織的誘導(dǎo)率,G21、G28、ROC22和B8的誘導(dǎo)率分別為85.17％,82.14％,84.10％和80.79％。
　　 (5)在外植體誘導(dǎo)前期先暗培養(yǎng)后光培養(yǎng)能提高愈傷組織誘導(dǎo)率,G21、G28、ROC22和B8的誘導(dǎo)率分別為86.95％,81.11％,83.60％和77.67％。
　　 (6)當(dāng)培養(yǎng)溫度為30℃時(shí),四個(gè)甘蔗品種的愈傷組織誘導(dǎo)率均達(dá)到最高值,G2

4、1、G28、ROC22和B8誘導(dǎo)率分別為88.33％,83.33％,86.27％和81.24％。
　　 (7)與其它季節(jié)相比較,在夏季取材,四個(gè)甘蔗品種愈傷組織誘導(dǎo)率均表現(xiàn)最高,G21、G28、ROC22和B8的誘導(dǎo)率分別達(dá)到84.00％,76.19％,83.59％和75.45％。
　　 (8)甘蔗外植體進(jìn)行低溫預(yù)處理會(huì)降低愈傷組織誘導(dǎo)效果。
　　 (9)不同季節(jié)甘蔗各品種之間的出愈時(shí)間早晚順序?yàn)?G21＜ROC

5、22＜G28＜B8,同一品種不同季節(jié)其外植體的褐化率也不同,其褐化率高低的排序?yàn)?冬＞春＞秋＞夏。
　　 (10)使用MS+2,4-D3.0mg/L+NAA0.2mg/L+KT1.0mg/L+AC0.03g/L+PVP1.5g/L培養(yǎng)基及激素組合能有效的降低冬季甘蔗外植體的褐化率,G21、G28、ROC22和B8的褐化率分別為10.11％,17.74％,14.31％和20.04％。
　　 2、甘蔗愈傷組織及胚性細(xì)胞團(tuán)繼代

6、增殖的試驗(yàn)結(jié)果
　　 (1)四種甘蔗品種均以MS+2,4-D3.0mg/L+NAA0.2mg/L+KT0.5mg/L培養(yǎng)基激素組合對(duì)胚性細(xì)胞團(tuán)的增殖效果最好,G21、G28、ROC22和B8的胚性細(xì)胞團(tuán)增殖倍數(shù)分別達(dá)到41.47倍,32.28倍,38.80倍和30.35倍。
　　 (2)胚性細(xì)胞團(tuán)培養(yǎng)時(shí)間為15天且繼代次數(shù)為第4代時(shí),四個(gè)甘蔗品種胚性細(xì)胞團(tuán)增殖倍數(shù)達(dá)到最大值。G21、G28、ROC22和B8的胚性細(xì)胞團(tuán)增

7、殖倍數(shù)分別達(dá)到46.23倍,41.22倍,44.80倍,37.33倍。
　　 (3)與其它光照培養(yǎng)處理相比,先暗培養(yǎng)再光培養(yǎng)處理的愈傷組織及胚性細(xì)胞團(tuán)增殖倍數(shù)最高。G21、G28、ROC22和B8的愈傷組織增殖倍數(shù)分別為4.45倍,3.33倍,4.13倍和3.13倍;而胚性細(xì)胞團(tuán)的增殖倍數(shù)則分別達(dá)到37.45倍,30.00倍,35.05倍和28.89倍。
　　 3、甘蔗愈傷組織及胚性細(xì)胞團(tuán)的分化試驗(yàn)結(jié)果
　　 (

8、1)四種甘蔗品種均以MS+NAA0.2mg/L+6-BA2.0mg/L+TDZ0.04mg/L培養(yǎng)基及激素組合對(duì)愈傷組織分化的效果最好,G21、G28、ROC22和B8的分化率分別達(dá)到86.83％,82.44％,88.89％和80.00％。
　　 (2)胚性細(xì)胞團(tuán)培養(yǎng)時(shí)間為15天,且繼代次數(shù)為第4代時(shí),四個(gè)甘蔗品種愈傷組織及胚性細(xì)胞團(tuán)分化率均達(dá)到最大值。G21、G28、ROC22、B8愈傷組織的分化率分別達(dá)到88.11％,84.

9、70％,90.97％,80.15％;而胚性細(xì)胞團(tuán)的分化出芽率則分別達(dá)到92.28％,89.00％,95.72％,87.98％。
　　 4、甘蔗芽增殖試驗(yàn)結(jié)果
　　 培養(yǎng)基與激素組合:MS+NAA0.2mg/L+6-BA2.5mg/L+PP3330.5mg/L有利于甘蔗芽增殖及芽的生長(zhǎng)。G21、G28、ROC22、B8四個(gè)甘蔗品種的芽增殖倍數(shù)分別為5.03倍,4.35倍,5.32倍,3.78倍。
　　 5、甘蔗無菌