核桃無融合胚離體培養(yǎng)初步研究.pdf

1、核桃(Juglans regia L.)具有無融合生殖能力，利用無融合胚建立核桃的離體再生體系，這在栽培和育種上均具有很重要的理論和實踐意義。本論文觀察了不同核桃品種（系）的無融合生殖率，研究了適宜的外植體滅菌方法和控制褐化的方法，篩選了誘導(dǎo)核桃胚萌發(fā)以及核桃莖段培養(yǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。主要結(jié)果如下：
　　1.不同核桃品種（系）的無融合生殖能力調(diào)查。采用套袋隔離，觀察了5個供試核桃品種（系）的無融合生殖能力。結(jié)果表明，供試材料均具

2、有無融合生殖能力，平均無融合生殖率為52.47％。其中，‘香玲’的無融合生殖率為54.67%，‘元林’為52.33%，‘瑞嘉’為56.67%，‘瑞秀’為49.67%，‘Y17’為49.00％，方差分析顯示各品種間無融合生殖能力差異顯著。
　　2.核桃離體胚萌發(fā)成苗的最佳培養(yǎng)基組合是DKW+6-BA2.0mg·L-1+PVP200mg·L-1+蔗糖30g·L-1+瓊脂7g·L-1。
　　最佳滅菌條件及培養(yǎng)基的選擇。外植體材料為

3、5個供試品種的無融合生殖胚，核桃胚在70％酒精消毒30s，0.1％升汞表面消毒5min的情況下滅菌效果最好，污染率僅為1.11％。核桃胚在MS、DKW、1/2MS、WPM等4個基本培養(yǎng)基中的萌發(fā)率差異顯著，在DKW中的萌發(fā)率最高為73.50％。培養(yǎng)基中添加蔗糖濃度為30g·L-1時，核桃胚萌發(fā)率最高為72.39％，不同濃度蔗糖的基本培養(yǎng)基誘導(dǎo)核桃胚萌發(fā)的差異顯著。培養(yǎng)基的pH值在5.8時，核桃胚的萌發(fā)率最高為73.04％，不同pH值的基

4、本培養(yǎng)基誘導(dǎo)核桃胚萌發(fā)的差異顯著。最佳取材時間的確定及不同品種（系）的萌發(fā)成苗率。取材時間在7月15號左右的核桃種胚萌發(fā)成苗率很高，為78.10％，核桃幼胚的萌發(fā)成苗率比成熟的核桃胚萌發(fā)成苗率高，不同的取材時間萌發(fā)成苗率差異顯著。核桃的5個品種中，‘Y17’的萌發(fā)成苗率最高為79.29％，5個品種之間的萌發(fā)成苗率差異顯著。
　　培養(yǎng)條件的優(yōu)化包括溫度、濕度、光照強度的篩選。當培養(yǎng)箱溫度為26℃，核桃胚萌發(fā)成苗率最高為71.35％，

5、相對濕度為40％，核桃胚的萌發(fā)率最高為71.37％，光強3000lx時，核桃胚的萌發(fā)率最高為71.33％，且不同的溫度條件之間，濕度條件之間、光照強度之間的差異性顯著。PVP的濃度為200mg·L-1，核桃胚的褐化率為2.26％，不同濃度的PVP對核桃胚褐化率影響差異性顯著。且轉(zhuǎn)接時間隔4天時可以降低核桃胚的褐化率。
　　植物生長調(diào)節(jié)劑的篩選。在核桃胚離體萌發(fā)的培養(yǎng)中，不同的植物生長調(diào)節(jié)劑對核桃胚的萌發(fā)成苗影響表現(xiàn)為當6-BA的濃

6、度為2.0mg·L-1時，核桃胚的萌發(fā)成苗率最高為73.58％。當KT的濃度為1.0mg·L-1時，核桃胚的萌發(fā)成苗率最高為70.46％。當2,4-D濃度為2.0mg·L-1時，核桃胚的萌發(fā)成苗率最高為60.68％。不同濃度的6-BA、KT、2,4-D之間影響核桃胚萌發(fā)成苗差異顯著，以6-BA的誘導(dǎo)效果最好。Picloram可以誘導(dǎo)核桃胚產(chǎn)生不定芽，且當Picloram的濃度為0.01mg·L-1時，產(chǎn)生的不定芽數(shù)最多，不定芽長勢最好，

7、不同濃度的Picloram對核桃胚不定芽的誘導(dǎo)差異性顯著。不同濃度的IBA對核桃胚萌發(fā)成苗影響差異不顯著，且誘導(dǎo)率極低。
　　3.核桃莖段不定芽萌發(fā)分化的最佳培養(yǎng)基組合是DKW+6-BA1.5mg·L-1+IBA0.01mg·L-1+PVP300mg·L-1+蔗糖30g·L-1+瓊脂7g·L-1。
　　在核桃的莖段培養(yǎng)中，植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA1.5mg·L-1和IBA0.01mg·L-1的組合， KT1.0mg·L-1和I