核桃無融合生殖的誘導(dǎo)及鑒定.pdf

1、本研究以6個核桃品種為試材采用11個處理進(jìn)行了無融合生殖誘導(dǎo)，并用SSR分子標(biāo)記對直接套袋隔離獲得的無融合生殖核桃后代與母本進(jìn)行鑒定。本研究還分析了核桃EST-SSR特點，初步探討利用核桃EST序列開發(fā)EST-SSR標(biāo)記的可行性。主要研究結(jié)果如下：
　　 1、6個核桃品種的無融合生殖平均誘導(dǎo)率為17.19％，薄殼香的誘導(dǎo)率最高為46.61％；雌先型的誘導(dǎo)率明顯高于雄先型；藥劑組合處理優(yōu)于單一藥劑，以0.2％的秋水仙素+2％的二甲

2、基亞砜平均誘導(dǎo)率最高為22.38％；各品種對不同藥劑的敏感性不同，薄殼香對1％二甲基亞砜最敏感，誘導(dǎo)率最高為72.88％；經(jīng)新復(fù)極差法分析，除木田峪6號、4-30、北京746三者在0.05水平差異不顯著外，其余各品種間差異顯著。
　　 2、進(jìn)行5因素（Taq酶、Mg2+、DNA模板、dNTPs及引物）4水平正交實驗，建立了核桃SSR擴增最佳反應(yīng)體系（20μl）：0.75U Taq酶、2.5 mM Mg2+、0.4μM Prime

3、r、0.3mM dNTPs、20ng模板DNA、雙蒸水補足20μl。
　　 3、用SSR分子標(biāo)記，每個品種選出10對母本具雜合位點的引物進(jìn)行無融合生殖核桃子代鑒定。結(jié)果表明：子代出現(xiàn)無擴增的頻率為0.74％，與母本帶型相同的頻率為46.30％，母本微衛(wèi)星雜合位點分離的頻率為47.22％，出現(xiàn)新型帶的頻率為5.74％；同一品種母本與子代、子代各個體之間有較大差異；子代SSR位點變異可能與基因型有關(guān)。
　　 4、從dbEST

4、數(shù)據(jù)庫用SSRHunter軟件對4500條核桃EST序列進(jìn)行搜索，EST-SSR出現(xiàn)頻率為10.27％，平均每5.65kbEST出現(xiàn)一個SSR。二核苷酸重復(fù)基序占主導(dǎo)地位，其次為三核苷酸，分別占總SSRR的49.57％和27.27％。二核苷酸EST-SSR的優(yōu)勢類型為AG，其次為AT，分別占二核苷酸SSR的67.25％和28.38％。三核苷酸優(yōu)勢類型為AAG，其次為ACC、AAT、AGG，分別占三核苷酸SSR的25.40％、21.43％