RAS系統(tǒng)在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：糖尿病視網(wǎng)膜?。―R）是1型糖尿病和2型糖尿病患者最主要的微血管病變之一，可導(dǎo)致患者視力下降甚至失明。在視網(wǎng)膜發(fā)生病變早期多數(shù)患者眼部無明顯異常，一旦出現(xiàn)明顯癥狀，視網(wǎng)膜病變已經(jīng)非常嚴(yán)重，喪失最佳治療時機(jī)。因此進(jìn)一步研究DR發(fā)病機(jī)制十分必要。本實(shí)驗(yàn)旨在研究糖尿病視網(wǎng)膜病發(fā)生過程中不同病程階段腎素血管緊張素系統(tǒng)（RAS）的變化、視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的凋亡情況，以及ERK通路的情況，了解腎素血管緊張素系統(tǒng)在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的作用。

2、　　方法：選取62只健康成年雄性SD大鼠，隨機(jī)分為對照組和糖尿病組，對照組22只，糖尿病組40只，將鏈尿佐菌素（STZ）用檸檬酸鹽緩沖液稀釋到1％，以50mg/kg一次性腹腔注射STZ破壞SD大鼠胰島β細(xì)胞，48h后測定尾靜脈血糖，血糖≥16.9 mmol/L認(rèn)為糖尿病誘導(dǎo)成功，誘導(dǎo)階段死亡9只大鼠，觀察1周后測量血糖，將血糖穩(wěn)定在16.9 mmol/L以上認(rèn)為建模成功期間死亡5只大鼠。對照組單純腹腔注射檸檬酸鹽緩沖液。建模成功后糖尿病

3、組大鼠明顯出現(xiàn)多飲、多食、消瘦的癥狀。在對照組及4周、8周和12周和糖尿病組隨機(jī)選取7只SD大鼠，取出各組中4只眼球進(jìn)行石蠟包埋，另10只眼球快速在顯微鏡下冰上分離視網(wǎng)膜組織，EP管凍存于-80℃。利用免疫組化法檢測CD14及8-羥脫氧鳥苷（8-OHdG）分子的表達(dá)，采用激光共聚焦顯微鏡觀察免疫組化切片，Image Pro Plus6.0軟件分析圖像，高倍視野下進(jìn)行光密度分析記錄每張片子的光密度（optical density，OD）值

4、。通過RT-PCR法在對照組及4周、8周和12周和糖尿病組分別檢測視網(wǎng)膜AT2R，PRR的mRNA表達(dá)，利用weston blot法檢測4周、8周和12周病程階段細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK1/2)，磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(p-ERK1/2)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：對照組、4周、8周和12周病程糖尿病大鼠視網(wǎng)膜AT2R的 mRNA平均表達(dá)量為（1.890±1.015）、（2.127±0.838）、（2.293±1.039）、（2.

5、243±1.258），PRR的 mRNA平均表達(dá)量為（1.653±1.019）、（2.260±0.916）、（2.640±1.028）、（2.880±1.090）糖尿病組AT2R和PRR明顯較對照組高，隨病程的延長表達(dá)量隨之增多。對照組、4周、8周和12周病程大鼠8-OHdG免疫組化光密度值(0.1827±0.025)、(0.1987±0.021)、（0.2425±0.314)、(0.252±0.028)，各組CD14染色無明顯差異。通

6、過相關(guān)性分析顯示，PRR和AT2R表達(dá)水平均與8-OHdG表達(dá)相關(guān)。各病程糖尿病組大鼠視網(wǎng)膜ERK1/2，磷酸化ERK1/2蛋白的表達(dá)量顯著高于對照組，且隨病程的延長逐漸增加。
　　結(jié)論：糖尿病視網(wǎng)膜病變中PRR和AT2R的表達(dá)與視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡有相關(guān)性。發(fā)病后糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織中腎素血管緊張素系統(tǒng)被明顯激活，并且隨著病程的發(fā)展RAS系統(tǒng)作用逐漸增強(qiáng)，RAS系統(tǒng)在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，可能通過增加ERK的磷酸化水