水蛭酶解提取物抑制脂多糖誘導的大鼠血管平滑肌細胞ICAM-1、VCAM-1及MCP-1的表達.pdf

1、動脈粥樣硬化(AS)是一種發(fā)生在大動脈血管壁上由慢性炎癥演變而來的脂代謝異常疾病[1]。血管平滑肌細胞(VSMCs)是動脈血管壁的主要組成細胞之一，其參與了AS病變的形成，正常情況下VSMCs只存在于血管中膜，當受到致AS因子刺激后，便會脫離血管中膜遷移至血管內(nèi)膜，并在內(nèi)膜下大量增殖[2]。單核細胞參與了AS斑塊形成過程中炎癥反應的發(fā)生，不僅內(nèi)皮細胞(ECs)與單核細胞間存在相互作用，而且VSMCs亦通過分泌諸如細胞間粘附分子-1(IC

2、AM-1)、血管細胞粘附分子-1(VCAM-1)及單核細胞趨化細胞因子-1(MCP-1)等細胞因子促進單核細胞的招募與粘附[3-4]。本實驗室前期研究表明，水蛭酶解提取物(HEE)作用于ApoE-/-小鼠后可以通過抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)位減弱AS斑塊的形成[5]，本實驗采用脂多糖(LPS)炎癥細胞模型驗證HEE對VSMCs粘附分子ICAM-1、VCAM-1和趨化因子MCP-1表達的影響。
　　實驗采用Ⅱ型膠原酶酶解法，從大鼠胸部主動

3、脈獲得原代VSMCs，傷口愈合實驗與Boyden小室結(jié)合熒光染料DiI實驗評價HEE對VSMCs遷移作用與粘附作用的影響。HEE對NF-κ B核轉(zhuǎn)位的影響用免疫熒光染色法測定，炎癥因子、粘附分子及趨化因子的表達同時用RT-PCR和Western-bloting測定。信號通路關鍵分子磷酸化與非磷酸化水平的檢測亦采用Western-bloting法。
　　Transwell小室實驗結(jié)果表明200μg/ml的HEE抑制VSMCs遷移的能

4、力與陽性藥物辛伐他汀(SIM)10μ M的抑制能力相當，抑制率均≥50％，Boyden小室研究結(jié)果表明200μg/mL的HEE也能抑制LPS誘導的VSMCs對THP-1及RAW264.7的趨化作用，抑制率分別為60％、80％，辛伐他汀的抗遷移能力介于HEE200μg/mL與400μg/mL之間。細胞粘附數(shù)目熒光計數(shù)實驗結(jié)果表明，水蛭酶解提取物可顯著抑制THP-1、RAW264.7與VSMCs的粘附。NF-κB p65熒光免疫染色實驗表明

5、，在VSMCs中100μ g/mL至400μg/mL的HEE可抑制LPS誘導的NF-κ B核轉(zhuǎn)位，且抑制效果隨HEE作用濃度的增加而逐步增強。RT-PCR和Western-bloting檢測結(jié)果顯示，在VSMCs中HEE不但能夠通過抑制p38MAPK的磷酸化在蛋白質(zhì)水平上降低LPS誘導的炎癥因子、趨化因子、粘附分子的表達，而且能夠濃度依賴性的抑制上述三類分子mRNA的表達。
　　綜上研究所述，本實驗室自主制備的水蛭酶解提取物可以顯