家蠅抗真菌肽MAF-1A的分子改良及抗白色念珠菌活性的研究.pdf

1、目的：以家蠅抗真菌肽MAF-1A為模板，對其氨基酸序列結(jié)構(gòu)進(jìn)行改造，探討MAF-1A氨基酸結(jié)構(gòu)與抗菌活性關(guān)系，為開發(fā)新型抗真菌藥物提供依據(jù)。
　　方法:
　　1、采用氨基酸替代法設(shè)計MAF-1A的衍生肽，運用生物信息學(xué)軟件分析其理化特性。
　　2、采用瓊脂擴(kuò)散法、微量液體稀釋法和菌落計數(shù)法檢測化學(xué)合成的衍生肽對白色念珠菌的抗菌活性、最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度(MFC)，并繪制時間-殺菌曲線。
　　3、掃

2、描電鏡觀察衍生肽對白色念珠菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)的影響。
　　4、噻唑藍(lán)（MTT）法檢測衍生肽對形成期和完全成熟的白色念珠菌生物被膜影響。
　　5、體外溶血實驗檢測衍生肽對人紅細(xì)胞的溶解活性。
　　結(jié)果：
　　1、通過氨基酸替換獲得并比較三種衍生肽MAF-1C、MAF-1D、MAF-1E，理化參數(shù)最優(yōu)的為MAF-1C,并且活性實驗初篩顯示MAF-1C抑菌效果最優(yōu)。MAF-1C為非跨膜陽離子線狀多肽，帶8個正電荷，二級結(jié)構(gòu)以α

3、螺旋為主，對比模板肽改造后的肽陽離子電荷增加了6個，親水性指數(shù)(GRAVY)由-1.081升高到0.588，不穩(wěn)定系數(shù)由42.27降低到5.83。
　　2、MAF-1C對白色念珠菌具有抗菌活性，MIC、MFC值分別為0.2mg/mL和0.5mg/mL，抗菌活性分別為模板肽的3倍和1.4倍。時間-殺菌曲線顯示，2×MIC濃度的MAF-1C與白念珠菌接觸后可發(fā)揮殺菌活性；掃描電鏡可見，其作用后白色念珠菌細(xì)胞表面出現(xiàn)明顯的凹陷、裂痕，之

4、后細(xì)胞皺縮、裂解死亡，并且菌細(xì)胞損傷程度與MAF-1C的濃度及作用時間呈正相關(guān)。
　　3、通過MTT實驗測定吸光值并計算其抑菌率，在作用時間相同的條件下，MAF-1C對白色念珠菌形成生物膜過程的抑制率隨濃度降低而減弱，呈劑量依賴性。對白色念珠菌成熟生物膜的抑制作用顯示，MAF-1C在相同濃度條件下，不同作用時間的抑制率大小為：48h>72h>24h，抑制率隨MAF-1C濃度降低對白色念珠菌生物膜的作用減弱。
　　4、MAF-

5、1C對人紅細(xì)胞表現(xiàn)出較高的溶血活性，并且呈現(xiàn)濃度依賴性，隨著濃度升高，溶血活性越強(qiáng)。
　　結(jié)論：
　　1、MAF-1C結(jié)構(gòu)參數(shù)及對白色念珠菌的抗菌活性均顯著優(yōu)于模板肽。
　　2、MAF-1C可通過破壞白色念珠菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)揮抗菌作用。
　　3、MAF-1C對白色念珠菌生物被膜的形成過程及成熟的生物被膜均具有抑制作用，作用表現(xiàn)為劑量依賴性；其對成熟的生物被膜抑制率與作用時間無明顯線性關(guān)系。
　　4、MAF-1C