大麥再生體系的建立及矮桿基因Bnrga-ds的轉(zhuǎn)化.pdf

1、大麥為世界上僅次于小麥、水稻和玉米的第四大禾谷類作物,因其具有很高的營養(yǎng)價值而在世界范圍內(nèi)廣泛種植,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中具有重要意義。大麥也是遺傳研究廣泛應(yīng)用的模式植物之一。目前研究者們致力于利用基因工程對大麥品種進行遺傳改良,但目前大麥遺傳轉(zhuǎn)化的技術(shù)仍存在一些問題,如能利用的基因型有限,外植體來源季節(jié)限制等。完善大麥再生技術(shù)體系,導(dǎo)入外源有利基因?qū)⒂欣诮窈蟮拇篼溸z傳改良。
　　 本研究以大麥不同品種為材料,分別建立了大麥成熟胚、幼胚

2、以及莖尖分生組織的再生體系,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將甘藍型油菜矮稈基因Bnrga-ds導(dǎo)入不同品種大麥的幼胚中,PCR鑒定證實,目的基因已經(jīng)整合到大麥基因組中,得到含有目的基因的轉(zhuǎn)基因植株。主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)以川農(nóng)4060,早豐一號,華大麥4號,華大麥5號,華大麥6號,華大麥7號共6個品種當年收獲的種子為材料,研究了不同的培養(yǎng)基、糖源、胚切割方式、外源激素的種類和濃度對大麥成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)的影響,以及不同激素配比對植株

3、再生的影響,建立了大麥成熟胚的再生體系。結(jié)果表明:Dicamba與2,4-D對幼胚愈傷誘導(dǎo)無顯著影響。華大麥4號、華大麥5號、華大麥6號愈傷組織誘導(dǎo)率較高,其中華大麥4號愈傷組織誘導(dǎo)率高達97.45％,愈傷組織分化依然存在很大問題,華大麥4號綠點率達78.26％,但很多綠點不能出芽,最終出芽率只有23.91％。
　　 (2)以8個大麥品種(早豐一號,皮棱波,美里黃金,浙農(nóng)大3號,華大麥4號,華大麥5號,華大麥6號,華大麥7號)的

4、幼胚為試驗材料,以Golden promise、Harrington為對照,通過組織培養(yǎng)篩選適合轉(zhuǎn)化的優(yōu)良受體基因型。研究結(jié)果表明:除早豐一號愈傷組織誘導(dǎo)率和植株再生率相對較低外,其他品種的離體培養(yǎng)效果都很好,均可作為遺傳轉(zhuǎn)化的受體。但愈傷組織繼代時間超過兩個月后,愈傷組織的分化能力會隨著時間逐漸下降。
　　 (3)以華大麥7號的莖尖為外植體,研究了不同培養(yǎng)基對大麥莖尖切段叢生芽誘導(dǎo)的影響。結(jié)果表明:莖尖切段在含1.0mg/l

5、TDZ和1mg/l6-BA的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中能誘導(dǎo)出叢生芽,而在含2.0mg/l2,4-D和2.5mg/l6-BA的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中先形成愈傷組織,后來分化出叢生芽。在沒有任何激素的培養(yǎng)基中生根較難,在添加0.5 mg/l IBA的培養(yǎng)基中生根,得到根系發(fā)達的叢生苗。莖尖再生體系的建立,為今后莖尖轉(zhuǎn)化奠定了基礎(chǔ)。
　　 (4)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化大麥幼胚:選取華大麥4號、華大麥5號、華大麥6號、華大麥7號的幼胚作為受體材料,用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進行