三種園林樹種再生體系的建立及抗寒基因轉(zhuǎn)化方法的研究.pdf

1、本文以常見的園林樹種女貞、泡桐和香樟為研究對象，研究了每一樹種的不同激素濃度配比對其愈傷組織、芽和根誘導(dǎo)的影響。優(yōu)化了三種常見園林樹種的再生條件，獲得了高效再生體系。再生結(jié)果表明，樹種泡桐和香樟的再生能力明顯高于樹種女貞，并篩選出三種樹種誘導(dǎo)愈傷組織、芽和根的最佳培養(yǎng)基。 文章以女貞的種子、帶腋芽的莖段為外植體，誘導(dǎo)植株再生，建立高效植株再生體系，并為下一階段的轉(zhuǎn)基因工作做準(zhǔn)備。實(shí)驗(yàn)獲得胚萌發(fā)、誘導(dǎo)莖段分化生長、愈傷組織、芽和根

2、的最佳培養(yǎng)基。以6-BA(0.5mg/l)+NAA(0.1mg/l)+GA(0.1mg/l)MS培養(yǎng)基，胚萌發(fā)的速度最高，6-BA2.0+NAA0.02的MS培養(yǎng)基莖段分化生長效果最佳；以北方抗寒香樟為試材，建立無菌外植體，篩選出側(cè)芽分化最佳培養(yǎng)基MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，繼代最佳培養(yǎng)基為MS+5.0mg/LBA+1.0mg/LIBA，同時(shí)進(jìn)行了葉片再生分化試驗(yàn)研究。 通過正交試驗(yàn)，從9個(gè)不同濃度的NA

3、A、BA和IBA組合的MS培養(yǎng)基中，找出了泡桐葉片、莖段及莖段愈傷組織誘導(dǎo)芽分化最適培養(yǎng)基分別為MS+6-BA(2mg/L)+NAA(0.2mg/L)+IBA(0.1mg/L)，MS+6-BA(1mg/L)+IBA(0.1mg/L)，MS+6-BA(1mg/L)+NAA(0.1mg/L)+IBA(0.05mg/L)。在建立起三種常見園林樹種再生體系的基礎(chǔ)上，主要先對女貞進(jìn)行了抗寒基因的遺傳轉(zhuǎn)化，利用三種轉(zhuǎn)基因方式，農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法