大麥成熟胚高效再生體系的建立和改良直鏈淀粉的轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、大麥作為啤酒生產(chǎn)的主要原料和一種優(yōu)良的飼料作物，在我國具有很大發(fā)展?jié)摿?。大麥的品種改良現(xiàn)多集中于啤用大麥與飼用大麥的品質(zhì)改良及各種抗性的研究，對(duì)于從大麥中提取直鏈淀粉的研究較少，鮮有報(bào)道。直鏈淀粉是重要的工業(yè)原料，用途涉及到30多個(gè)領(lǐng)域。我們提出開展玉米淀粉分支酶基因sbe1、sbe2b反向轉(zhuǎn)化大麥并對(duì)轉(zhuǎn)基因大麥中淀粉結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定分析的研究，可望揭示出大麥基因組中SBE能否調(diào)控淀粉結(jié)構(gòu)，明確利用玉米淀粉分支酶基因來創(chuàng)新大麥材料、培育高直

2、鏈淀粉大麥品種的可能性。 大麥成熟胚由于取材不受時(shí)間限制，數(shù)量也可保證，是進(jìn)行生物技術(shù)研究和創(chuàng)新大麥品種資源的一個(gè)良好試驗(yàn)系統(tǒng)。但成熟胚培養(yǎng)誘導(dǎo)胚性愈傷組織質(zhì)量較差，大部分品種難以再生，嚴(yán)重妨礙了大麥基因工程研究的順利開展。因此，研究大麥成熟胚組織培養(yǎng)條件和植株再生頻率的影響因素，建立大麥成熟胚高效再生體系對(duì)于有效地開展大麥轉(zhuǎn)基因研究具有重要意義。本研究以208813-509、混送2號(hào)、87-0053、97-4010、97-60

3、04、308-1、S-009、97-4104、Yorkton、87-3175共10個(gè)品種當(dāng)年收獲的種子為材料，研究了不同組培條件對(duì)大麥成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)與植株再生的影響，建立了大麥成熟胚高效再生體系。篩選出了愈傷組織誘導(dǎo)頻率和綠苗分化率均較高、適合于遺傳轉(zhuǎn)化的材料87-3175、87-0053、97-4010、97-6004及208813-509。 在建立了良好的大麥成熟胚再生體系的基礎(chǔ)上，利用實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建好的玉米淀粉分支酶基因

4、表達(dá)載體，以大麥胚性愈傷組織為受體材料，用基因槍法對(duì)篩選出的5個(gè)大麥品種進(jìn)行了轉(zhuǎn)化。 轉(zhuǎn)化大麥中，5個(gè)不同基因型品種的抗性愈傷獲得率為10.32％～17.13％，將抗性愈傷組織轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基中進(jìn)行分化，綠苗分化率為0～14.29％，移栽到小花盆中的再生植株有28株。其中87-3175有11株，87-0053有9株，97-4010有3株，97-6004未分化出苗，208813-509有5株；移栽成活的87-3175有4株，87-