PRRSV四種受體在萊蕪黑豬主要組織中的相對表達量檢測.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus，PRRSV)引起的，以母豬繁殖障礙（流產、死產、弱胎、木乃伊胎）以及仔豬的呼吸道癥狀和高死亡率為主要特征的一種新型傳染病。該病1987年首次在美國發(fā)生，1990年首次在荷蘭從肺泡巨噬細胞

2、中分離到病原，之后在德國、西班牙、英國、法國、丹麥等國家也先后報道發(fā)生該病。1996年郭寶清等人用間接免疫熒光法首次證實本病在國內存在。PRSSV有2個血清型，美洲型和歐洲型，我國爆發(fā)的主要以美洲型為主。
　　 為了檢測地方品種豬對PRRSV的耐受性及病毒在體內的增殖規(guī)律，15頭經RT-PCR檢測為PRRSV抗原陰性和ELISA檢測為PRRSV抗體陰性的30日齡健康萊蕪黑豬仔豬，隨機分為2組，攻毒組10頭，對照組5頭，分別人工鼻

3、腔接種1mL/頭(104TCID50/mL) PRRSV液和PBS。分別于感染后觀察攻毒豬的臨床癥狀，并于第3d、7d、14d、21d、28d剖殺對照組1頭、攻毒組2頭試驗豬，觀察攻毒豬病理變化，采集心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、扁桃體、下頜淋巴結、腹股溝淋巴結和腸系膜淋巴結并立即放入液氮中，-80℃保存。
　　 為檢測PRRSV在萊蕪黑豬體內的增殖規(guī)律，本研究合成了TaqMan探針，并建立了檢測PRRSV的絕對定量PCR方法，

4、得到標準曲線方程為y=-3.1843x+39.241867，相關系數R2=0.99，該方法特異性和重復性好，靈敏度高，最低可檢測到10拷貝數的病毒，比普通PCR方法高10倍～100倍。應用建立的熒光定量RT-PCR方法對各組織中病毒進行定量。結果表明，對照組萊蕪黑豬PRRSV呈陰性，感染組PRRSV均呈陽性。PRRSV攻毒后第3d感染組豬的各組織中均檢測到低拷貝病毒核酸存在，攻毒后7～21d，各種組織中的病毒載量維持在較高水平，而攻毒后

5、第28d時，多數組織中的PRRSV病毒含量明顯下降。扁桃體及各種淋巴結中的病毒載量要明顯高于其他臟器，顯示PRRSV在感染萊蕪黑豬后對淋巴組織具有組織嗜性。
　　 建立檢測PRRSV的四種受體（包括五號受體、唾液酸黏附素受體、CD163受體和波形蛋白受體）的相對熒光定量RT-PCR方法。應用建立的熒光定量RT-PCR方法檢測攻毒后3d、7d、14d、21d、28d萊蕪黑豬各組織中PRRSV的上述四種受體相對表達量變化情況。結果發(fā)