人源脂聯(lián)素及其受體的表達(dá)純化和兩者間相互作用的研究.pdf

1、脂肪細(xì)胞分泌表達(dá)的脂聯(lián)素能夠識(shí)別、結(jié)合肝臟或骨骼肌中的脂聯(lián)素受體，通過下游AMPK、PPARα等途徑刺激葡糖糖攝取和脂肪酸氧化，維持體內(nèi)能量穩(wěn)態(tài)，發(fā)揮胰島素增敏作用。脂聯(lián)素及其受體代謝或功能異常導(dǎo)致機(jī)體多種疾病的發(fā)生，如胰島素耐受、肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化等等，恢復(fù)其含量或功能能夠有效緩解各類疾病。因此，脂聯(lián)素及其受體成為治療胰島素耐受等疾病的全新重要靶點(diǎn)。在體內(nèi)，脂聯(lián)素球形結(jié)構(gòu)域部分能夠結(jié)合肝中 AdipR1，形成配體-受體復(fù)合物，但兩者間

2、相互作用機(jī)制尚不清楚。
　　本文構(gòu)建了脂聯(lián)素（104-244）原核及昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，鑒定及篩選了表達(dá)純化克隆，通過親和純化得到帶有GST或MBP融合蛋白的脂聯(lián)素蛋白及經(jīng)PPase和TEV水解去除融合蛋白后單獨(dú)的脂聯(lián)素蛋白，并對(duì)蛋白蛋白行為進(jìn)行分子篩分析。結(jié)果顯示，試驗(yàn)純化的到的脂聯(lián)素蛋白在自然條件下能形成二聚體。構(gòu)建了脂聯(lián)素受體1三種截短體（22-375、72-37、89-375）蛋白昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，優(yōu)化蛋白表達(dá)及純化條件，純