果蠅GABAB受體亞基C末端間的相互作用.pdf

1、γ-氨基丁酸(GABA)主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，它是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中十分重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì),它能夠通過(guò)與GABA受體相結(jié)合而行使其生物學(xué)上的功能。在神經(jīng)細(xì)胞中存在著兩種不同類(lèi)型的GABA受體，分別是離子型γ-氨基丁酸受體—GABAA受體、GABAC受體和代謝型γ-氨基丁酸受體—GABAB受體（metabotropic GABA receptor type B，GABABR），GABABR屬于G蛋白偶聯(lián)受體(G-protein coup

2、led receptor，GPCR) C家族，它可以介導(dǎo)緩慢和長(zhǎng)時(shí)程的突觸傳遞抑制效應(yīng)。GABABR受體在突觸前和突觸后都有分布，它在許多中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中具有重要的作用。它也被證明參與細(xì)胞的生存,指導(dǎo)神經(jīng)生長(zhǎng)錐,神經(jīng)元遷移和定位?；谝陨显?，GABAB受體可以作為多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病和精神疾病治療的藥物靶點(diǎn)。
　　黑腹果蠅（Drosophila melanogaster）,一般稱(chēng)為“果蠅”(Fruit fly),在實(shí)驗(yàn)遺傳學(xué)和發(fā)育

3、生物學(xué)中是一個(gè)非常理想的生物模型，近幾年以來(lái)果蠅在神經(jīng)科學(xué)中包括神經(jīng)藥理學(xué)中越來(lái)越多地被用作一個(gè)生物模型。因?yàn)橄鄬?duì)于典型的哺乳動(dòng)物模型果蠅具有很多的優(yōu)勢(shì)，例如利用果蠅我們可以獲的更好的可操作性的遺傳基因，在較低的成本下可以得到無(wú)數(shù)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象,而且人們對(duì)于果蠅的監(jiān)管限制非常少。利用果蠅作為生物模型，已經(jīng)證明，GABAB受體可能參與乙醇和?-羥丁酸在疼痛中的行為作用。除此以外，還有研究結(jié)果顯示，果蠅的GABAB受體在發(fā)育過(guò)程中可能發(fā)揮著重要

4、的作用，并且能夠參與嗅覺(jué)作用和調(diào)節(jié)生物周期節(jié)律。
　　然而，我們?nèi)匀粦?yīng)該認(rèn)識(shí)到昆蟲(chóng)與哺乳動(dòng)物之間的本質(zhì)性區(qū)別，只有更加清楚的了解果蠅GABAB受體（DGABABR）與哺乳動(dòng)物GABAB受體之間的不同和造成這種不同的原因，我們才能更好的利用果蠅這個(gè)模型代替哺乳動(dòng)物模型進(jìn)行神經(jīng)科學(xué)包括神經(jīng)藥理學(xué)方面的研究。
　　在本研究中，首先以pRK質(zhì)粒作為載體，分別構(gòu)建含有果蠅GABAB受體兩個(gè)亞基DGABAB1（DGB1）和GABAB2（

5、DGB2）的質(zhì)粒，其中GB1和GB2的N末端分別融合了HA和Flag標(biāo)簽蛋白，標(biāo)記為HA-DGABAB1R（HA-DGB1）和Flag-DGABAB2R（Flag-DGB2），然后把質(zhì)粒以不同的組合方式轉(zhuǎn)入細(xì)胞中，利用Elisa技術(shù)分別檢測(cè)兩個(gè)受體亞基在細(xì)胞表面的表達(dá)情況。然后把果蠅GABAB受體的膜表達(dá)模式與大鼠GABAB受體的膜表達(dá)模式進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)果蠅GABAB受體的膜表達(dá)模式與大鼠的正好相反。然后我們對(duì)引起這種差別的原因進(jìn)行了探

6、索，首先利用定點(diǎn)突變的方法尋找DGB2上的滯留序列，但是沒(méi)有找到。隨后我們利用終止突變的方法對(duì)DGB2 C末端與DGB1相互作用的關(guān)鍵性區(qū)域進(jìn)行了探索，發(fā)現(xiàn)果蠅DGB2上的L777位點(diǎn)對(duì)于DGB1C末端與DGB2C末端之間的相互作用十分重要。
　　綜上所述，本研究主要是對(duì)果蠅GABAB受體兩個(gè)亞基DGB1與DGB2C末端的相互作用進(jìn)行了研究，找出來(lái)DGB2C末端對(duì)于果蠅GABAB受體兩亞基C末端相互作用的關(guān)鍵性區(qū)域，并把2001年