澤瀉湯降血脂作用機(jī)理研究.pdf

1、1、相關(guān)的文獻(xiàn)研究
　　 高脂血癥是當(dāng)今一種很常見的慢性疾病,其發(fā)病的原因是由于機(jī)體的脂質(zhì)代謝紊亂,導(dǎo)致機(jī)體代謝失去平衡,有關(guān)的物質(zhì)大量積累,弓}發(fā)脂肪肝、糖尿病、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓及心血管疾病等,極大地威脅著人們的生命健康。高脂血癥的臨床表現(xiàn)為血清TC、TG的濃度較高,HDL-C的濃度較低。
　　 目前有較多的中藥及復(fù)方用于高脂血癥的治療,并取得了較好的療效。澤瀉湯是出自東漢醫(yī)圣張仲景《金匱要略》里的經(jīng)典驗(yàn)方,該藥方

2、由澤瀉、白術(shù)兩位中藥材配伍組成,澤瀉的作用重在利水下行、祛濕功效,可以使已停之飲從小便而去;白術(shù)的作用則重在健脾制水功效,可以使水濕既化而不復(fù)聚。該方最早用于治療昏冒眩暈,后來也用于治療高脂血癥,實(shí)際上是對(duì)澤瀉湯應(yīng)用范圍的進(jìn)一步擴(kuò)大,用藥作用目的及機(jī)理基本相同。并經(jīng)過長(zhǎng)期的臨床驗(yàn)證,證明該方有較好的降血脂作用。但是目前對(duì)澤瀉湯降血脂機(jī)理方面的研究文獻(xiàn)不多,且作用機(jī)理沒有得到較好地闡明,還處在初期的探索階段。普遍認(rèn)為澤瀉湯降血脂的作用機(jī)理

3、有,澤瀉湯能影響外源性膽固醇的吸收,或者是澤瀉湯能干預(yù)機(jī)體對(duì)內(nèi)源性膽固醇的分解代謝,同時(shí)澤瀉湯的降血脂作用還可能與其能提高機(jī)體的抗氧化能力,降低機(jī)體的氧化應(yīng)激性有關(guān)。也有學(xué)者認(rèn)為,一些中藥降血脂的作用機(jī)理還可能與藥物能對(duì)機(jī)體的肝,脾、腎的保護(hù)作用有關(guān),調(diào)節(jié)這些器官功能的平衡,有助于維持機(jī)體正常的生理功能,調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝紊亂等作用有關(guān)。用分子生物學(xué)手段研究澤瀉湯的進(jìn)行作用機(jī)制也處在探索的階段。對(duì)肝臟中調(diào)節(jié)膽固醇合成的基因以及影響影響膽固醇合

4、成、促進(jìn)膽固醇分解的關(guān)鍵酶等(如Hmgcr、Srebf2、Fasn、Cyp7a1等)的研究,是目前降血脂藥物機(jī)理研究的重點(diǎn)之一,對(duì)調(diào)節(jié)高脂血癥的關(guān)鍵基因進(jìn)行研究可能是從根本上闡明藥物降血脂作用的有效方法。對(duì)澤瀉湯降血脂作用的機(jī)理的闡明一方面可以指導(dǎo)臨床用藥安全,另一方面也是尋找及開發(fā)新型降血脂藥物的有效途徑,具有重要意義。
　　 2、實(shí)驗(yàn)部分
　　 2.1、澤瀉湯降血脂作用機(jī)理初步研究目的:通過澤瀉湯對(duì)高脂血癥小鼠血脂的

5、影響,初步探討澤瀉湯降血脂的作用機(jī)理。方法:采用高脂飼料喂養(yǎng)法建立小鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥模型,將高脂血癥小鼠分成6個(gè)組,分別為高脂血癥模型組,正常對(duì)照組,陽性組,澤瀉湯水提取物高、中、低三個(gè)劑量組。用澤瀉湯水提物高、中、低三個(gè)劑量組連續(xù)給藥4w,觀察并記錄各組小鼠的行為及生活狀況。摘眼球取血,分離血清,測(cè)定高脂血癥小鼠血清TC、TG、HDL-C、SOD、MDA、ALT、AST等生化指標(biāo),觀察各組織器官的病理變化及取部分肝臟用10％的福爾馬林

6、固定,石蠟包埋切片,HE染色后進(jìn)行光鏡檢查。其余的臟器置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩＝Y(jié)果:給藥4w后,高脂血癥小鼠血清TC、TG顯著降低,HDL-C、SOD顯著升高,ALT、AST也顯著降低。
　　 結(jié)論:中藥澤瀉湯水提取物對(duì)高脂血癥小鼠有較好的降血脂作用,且高劑量組效果最好。其降血脂作用機(jī)理可能是對(duì)肝、腎、脾等臟器的保護(hù),調(diào)節(jié)機(jī)體代謝平衡,以及改善機(jī)體抗氧化能力,減小氧化應(yīng)激性等。
　　 2.2、澤瀉湯的LC-MS/MS指

7、紋圖譜的建立
　　 目的:通過建立澤瀉湯水提取物的LC-MS/MS指紋圖譜,標(biāo)準(zhǔn)化澤瀉湯降血脂的有效成分,為澤瀉湯降血脂作用機(jī)理的研究奠定基礎(chǔ)。方法:采用LC-MS/MS聯(lián)用技術(shù),以實(shí)驗(yàn)一中使用的澤瀉湯水提取物為樣本,建立澤瀉湯降血脂有效成分的指紋圖譜。結(jié)果:建立了澤瀉湯降血脂有效成分的指紋圖譜。結(jié)論:該方法建立的澤瀉湯指紋圖譜方便、可行,能有效地對(duì)澤瀉湯降血脂有效成分進(jìn)行控制,標(biāo)準(zhǔn)化了澤瀉湯的各成分,對(duì)研究澤瀉湯降血脂作用以及

8、降血脂作用機(jī)制的研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 2.3、澤瀉湯降血脂作用機(jī)理研究
　　 目的:通過對(duì)澤瀉湯進(jìn)行拆方與組方研究澤瀉湯的降血脂作用,探討澤瀉湯降血脂作用的機(jī)理。方法:對(duì)澤瀉湯進(jìn)行拆分,先分別制備澤瀉,白術(shù),以及復(fù)方澤瀉湯的水提取物。采用高脂飼料喂養(yǎng)法建立小鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥模型,將高脂血癥小鼠分成6個(gè)組,分別為高脂血癥模型組,正常對(duì)照組,陽性組,澤瀉湯水提取物組、澤瀉水提取物組、白術(shù)水提取物組。用澤瀉湯水提取物、澤

9、瀉水提取物、白術(shù)水提取物連續(xù)給藥4w,觀察小鼠的行為及生活狀況。摘眼球取血,分離血清,測(cè)定高脂血癥小鼠血清TC、TG、HDL-C、SOD、MDA、ALT、AST等生化指標(biāo),觀察各組織器官的病理變化及取部分肝臟用10%的福爾馬林固定,石蠟包埋切片,HE染色后進(jìn)行光鏡檢查,各組織置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。研究?fù)方澤瀉湯水提取物、單一的澤瀉水提取物、白術(shù)水提取物對(duì)高脂血癥小鼠的血脂影響,并采用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù),研究澤瀉湯等對(duì)調(diào)血脂的關(guān)鍵基因

10、(Hmgcr、Srebf2、Fasn、Cyp7a1)表達(dá)的影響。結(jié)果:澤瀉湯水提取物組仍然有較好的降血脂作用,澤瀉水提取物組也有較弱的降血脂作用,而白術(shù)水提物組基本沒有降血脂作用。澤瀉湯對(duì)高脂血癥小鼠肝臟中Hmgcr、Srebf2、Fasn的表達(dá)有較顯著地抑制作用,而對(duì)Cyp7a1的表達(dá)無顯著作用。結(jié)論:澤瀉湯有較好的降血脂作用,其降血脂作用與澤瀉和白術(shù)的配伍協(xié)同作用有關(guān),其降血脂作用機(jī)理還與澤瀉湯能調(diào)節(jié)膽固醇的合成與代謝基因表達(dá)有關(guān),