翡翠貽貝糖受聚糖降血脂作用的研究.pdf

1、翡翠貽貝(Perna viridis)別名青口螺,廣泛分布于東海南部和南海,其繁殖能力很強(qiáng),易于養(yǎng)殖。但由于缺乏市場及有效的加工手段,其資源未能得到充分的利用。動脈粥樣硬化、脂肪肝、心腦血管疾病已成為危害人類健康的主要疾病,而脂質(zhì)代謝異常,特別是血膽固醇水平升高是基本易患因素。因此,如何有效調(diào)節(jié)血脂,是目前營養(yǎng)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。
　　 本論文研究了翡翠貽貝糖胺聚糖的分離純化條件及其理化性質(zhì),探討翡翠貽貝糖胺聚糖對高脂小鼠機(jī)體血脂

2、的調(diào)節(jié)作用,同時(shí)研究了翡翠貽貝糖胺聚糖對高脂小鼠抗氧化能力的影響,以期為翡翠貽貝糖胺聚糖營養(yǎng)價(jià)值評價(jià)的建立提供理論依據(jù),為翡翠貽貝的開發(fā)提供參考,為貝類的發(fā)展做出一定貢獻(xiàn)。主要研究內(nèi)容如下:
　　 (1)在最優(yōu)條件下大量提取糖胺聚糖粗品(PVG),通過等電點(diǎn)除蛋白、超濾濃縮得精制品(PVG-1),并采用DEAE-52纖維素離子交換柱層析法對精制品進(jìn)行純化,分離出來含量較高的兩個(gè)極分(PVG-1-1,PVG-1-3),再經(jīng)過Sep

3、hadex G-200凝膠柱進(jìn)行進(jìn)一步分離純化,得到兩個(gè)極分(PVG-1-1a,PVG-1-3a)。檢測各組分的組成成分,PVG、PVG-1、PVG-1-1、PVG-1-3、PVG-1-1a、PVG-1-3a測定的總糖含量分別是20.34％、26.51％、40.64％、37.56％、49.56％、43.12％；糖胺聚糖含量分別是26.81％、45.36％、66.78％、60.45％、75.56％、69.78％；總蛋白含量分別是33.43

4、％、18.12％、13.85％、11.89％、10.75％、8.45％；硫酸基含量分別是4.53％、6.89％、12.47％、14.85％、19.65％、21.56％；氨基半乳糖含量分別是2.32％、3.71％、6.64％、8.65％、7.67％、10.56％；糖醛酸含量分別是5.88％、7.89％、12.78％、10.67％、19.85％、16.56％；氨基己糖含量分別為10.21％、19.36％、29.61％、33.42％、35.6

5、7％、39.67％,并用高效液相對PVG-1-1a、PVG-1-3a純度進(jìn)行鑒定,各有一個(gè)吸收峰,說明為均一多糖。用高效液相色譜法對PVG-1-1a、PVG-1-3a進(jìn)行分子量測定,PVG-1-1a、PVG-1-3平均相對分子質(zhì)量為5.20×105Da和2.58×105Da；采用紅外光譜法分析PVG-1-1a、PVG—1-3a特征基團(tuán)和結(jié)構(gòu)等,PVG-1-1a、PVG-1—3a都有氨基多糖的特征吸收。
　　 (2)取雄性昆明小鼠

6、72只,每組12只。隨機(jī)分正常對照組(灌飼生理鹽水)、模型對照組(灌飼生理鹽水)、陽性對照組(灌飼辛伐他汀5mg/kg)、翡翠貽貝糖胺聚糖低劑量組(50mg/kg)、中劑量組(100mg/kg)、高劑量組(200mg/kg)。正常對照組動物從試驗(yàn)開始至結(jié)束用普通飼料喂養(yǎng),其他五組動物均喂高脂飼料。30d后測定小鼠血清總膽固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C),低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和一氧化氮(NO)含

7、量,肝臟TC、TG含量,血清卵磷脂膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶(LCAT)以及血清和肝臟脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)活性。結(jié)果表明翡翠貽貝糖胺聚糖對小鼠體重增長無影響(P>0.05),中、高劑量組可以提高肝指數(shù)(P<0.05),降低腎指數(shù)(P<0.05)。翡翠貽貝糖胺聚糖中、高劑量組能明顯降低模型小鼠血清TC,TG,LDL-C含量和動脈粥樣硬化指數(shù)(AI)(P<0.01),顯著降低肝臟TC(P<0.01)、TG(P<0.01)含量,提高血清

8、HDL-C和NO(P<0.01)含量,提高血清LCAT,血清和肝臟HPL、HL(P<0.05或P<0.01)活性。說明翡翠貽貝糖胺聚糖有顯著的降血脂效應(yīng),該作用可能與翡翠貽貝糖胺聚糖能明顯增強(qiáng)LCAT、LPL、HL酶活性,提高HDL-C、NO水平有關(guān)。
　　 (3)翡翠貽貝糖胺聚糖體外抗氧化作用研究:以抗氧化劑維生素C為對照,選用OH自由基、DPPH自由基、超氧陰離子自由基和體外抗肝組織自發(fā)性脂質(zhì)過氧化清除實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證翡翠貽貝糖胺

9、聚糖體外抗氧化作用的強(qiáng)弱。當(dāng)PVG-1濃度達(dá)到8mg/mL時(shí),對·OH的清除率最高,為55.17％,同樣濃度下PVG的·OH清除率為44.59％。清除DPPH自由基的試驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)濃度增加到8mg/mL時(shí),PVG-1的清除率達(dá)到61.96％,PVG的清除率達(dá)到45.09％。在PVG濃度為6mg/mL時(shí),對O2-·的清除率達(dá)到最大,為56.98％,在PVG-1濃度為5mg/mL時(shí),對O2-·的清除率達(dá)到最大,為68.36％。當(dāng)PVG濃度

10、為7 mg/mL時(shí),LPO清除率為46.78％,在PVG-1濃度為7 mg/mL時(shí),LPO清除率為62.56％?？梢婔浯滟O貝糖胺聚糖有很好的清除自由基效果,且抗氧化效果有明顯的量效關(guān)系。
　　 研究了PVG-1對高脂血癥小鼠體內(nèi)抗氧化酶活力的影響。檢測了小鼠血清和肝臟總抗氧化能力(T-AOC),小鼠血清和肝臟、腦中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活力。結(jié)果表明,

11、PVG-1中、高劑量組能提高模型對照組小鼠血清和肝臟T-AOC含量(P<0.05或P<0.01),PVG-1中、高劑量組能顯著降低高脂血癥小鼠血清、肝臟和腦中MDA(P<0.01)含量,提高血清GSH-Px(P<0.05或P<0.01)、CAT(P<0.01)、SOD(P<0.01)活力；肝臟GSH-Px(P<0.01)、CAT(P<0.05或P<0.01)、SOD活力(P<0.01);腦中GSH-Px(P<0.01)、CAT(P<0.