金櫻子總黃酮抗心腦血管疾病作用的初步研究.pdf

1、目的:初步考察金櫻子總黃酮(TFs)對(duì)心腦血管疾病的保護(hù)作用并探討其可能的分子機(jī)制。
　　 方法:本研究主要從以下方面進(jìn)行，在體外實(shí)驗(yàn)中:TFs對(duì)過氧化氫(H2O2)導(dǎo)致的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)損傷的保護(hù)作用。在篩選出合適的H2O2造模劑量和處理時(shí)間以及TFs的預(yù)處理時(shí)間和給藥濃度的情況下，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)TFs對(duì)細(xì)胞周期的影響，DAPI染色觀察TFs對(duì)細(xì)胞核的保護(hù)作用，羅丹明123測(cè)定線粒體膜電位（△(Ψ)m），透

2、射電鏡(TEM)觀察線粒體微結(jié)構(gòu)，試劑盒檢測(cè)活性氧(ROS)和谷胱甘肽(GSH)水平、NO釋放量以及Caspase-3和-9酶活性，并考察了TFs對(duì)Proaspase-3、Bcl-2、Bak、Bax、Bid和p53蛋白表達(dá)的影響。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中:(1)正常小鼠分別被灌胃TFs(25、50和100mg/kg)10天，阿司匹林為陽性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，小鼠斷頭處死，測(cè)定小鼠斷頭喘息時(shí)間、腦組織超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH

3、-PX)和丙二醛(MDA)水平，觀察腦組織病理學(xué)切片，也考察了TFs對(duì)Proaspase-3、Bcl-2、Bak、Bax和Bid蛋白表達(dá)的影響。(2)正常小鼠被灌胃TFs(25、50和100mg/kg)10天，阿司匹林為陽性對(duì)照，角叉菜膠誘導(dǎo)小鼠形成尾部血栓模型后測(cè)定24、48和72h的黑尾長度。(3)正常大鼠被灌胃TFs(20、40和60mg/kg)，阿司匹林為陽性對(duì)照，造成動(dòng)靜脈旁路血栓模型后測(cè)定血栓濕重和干重。
　　 結(jié)果

4、:在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，100μMH2O2作用2h，HUVECs的抑制率為63％，TFs可顯著增加細(xì)胞活性，呈劑量依賴性;模型組S期細(xì)胞比率為38.19％，TFs組比率分別下降至22.56％、28.61％和29.56％;TFs能保護(hù)H2O2導(dǎo)致的細(xì)胞核損傷并可顯著逆轉(zhuǎn)H2O2造成的△(Ψ)m損失;與模型組比較，TFs組細(xì)胞線粒體相對(duì)熒光強(qiáng)度呈劑量依賴性增強(qiáng)，且線粒體水腫輕微，脊形態(tài)良好，并可顯著抑制細(xì)胞ROS的產(chǎn)生。同時(shí)，TFs組細(xì)胞GSH的水

5、平為H2O2組的1.14、1.40(p＜0.05)和1.60(p＜0.01)倍，而各組NO的釋放量無明顯差異。TFs還可顯著抑制Caspase-3和Caspase-9的活性，上調(diào)Proaspase-3和Bcl-2蛋白的表達(dá)，下調(diào)Bak、Bax、Bid和p53蛋白的表達(dá)。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，TFs可延長小鼠斷頭喘息時(shí)間，降低腦組織MDA含量，提高SOD及GSH-PX水平，上調(diào)Procaspase-3及Bcl-2蛋白的表達(dá)，下調(diào)Bax、Bak和B