新型基因及藥物微泡載體系統(tǒng)的制備研究.pdf

1、第一部分脂質(zhì)微泡-陽離子納米脂質(zhì)體復合體制備的實驗研究
　　 目的：利用生物素親和素系統(tǒng)，將陽離子納米脂質(zhì)體連接在脂質(zhì)微泡表面，制備一種新型基因微泡載體。
　　 方法：1、將一定摩爾比的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)與生物素化聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(Bio-PEG-DSPE)置于甘油及PBS混懸液中，并加入微量異硫氰酸熒光素(FITC)，充分混勻后，采用機械振蕩法，制備生物素化脂質(zhì)微泡(Bio-LMB)。同時，用二

2、硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)取代Bio-PEG-DSPE，采用相同方法制備非生物素化脂質(zhì)微泡(LMB)作為對照。
　　 2、取一定摩爾比的氫化大豆卵磷脂(HSPC)、3β-[N-（N＇，N＇-二甲基胺乙基）胺基甲?；鵠膽固醇(DC-Chol)、Bio-PEG-DSPE溶于適量氯仿，并加入微量羅丹明6G，充分溶解后，采用薄膜分散-膜擠壓法，制備生物素化陽離子納米脂質(zhì)體(Bio-CNLP)。同時，取相同比例的HSPC與DC-Cho

3、l，采用相同方法制備非生物素化陽離子納米脂質(zhì)體(CNLP)作為對照。
　　 3、將Bio-LMB與過量的親和素4℃孵育30min，靜置后抽吸下層過量親和素，同時加入過量Bio-CNLP，4℃繼續(xù)孵育30min。相同方法連接LMB與CNLP作為對照組。
　　 4、取漂浮在上層的乳液，行激光共聚焦顯微鏡觀察實驗組與對照組的連接效果。
　　 結果：激光共聚焦顯微鏡下Bio-LMB+Bio-CNLP組可見綠色Bio-LM

4、B壁因連接Bio-CNLP而不光滑，周圍可見數(shù)量不等的紅色小圓形點狀Bio-CNLP呈花環(huán)狀聚集，而LMB+CNLP組LMB壁光滑，周圍未見CNLP聚集。
　　 結論：采用生物素親和素連接系統(tǒng)，可將Bio-CNLP牢固連接于Bio-LMB表面，為探索新型基因微泡載體提供一種新思路，有望為腫瘤靶向基因治療提供一種新方法。
　　 第二部分脂質(zhì)微泡-PLGA納米微球復合體制備的實驗研究
　　 目的：采用碳二亞胺法，將P

5、LGA納米微球連接在脂質(zhì)微泡表面，制備一種新型藥物微泡載體。
　　 方法：1、將一定摩爾比的二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、氨基化聚乙二醇二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(NH2-PEG-DSPE)置于甘油及PBS溶液的混懸液中，充分混勻后，采用機械振蕩法制備表面帶氨基脂質(zhì)微泡(NH2-LMB)。
　　 2、采用雙乳化法制備普通乳酸/羥基乙酸共聚物(PLGA)納米微球(NP)。
　　 3、取部分NP，采用碳二亞胺法活化其表面

6、的羧基得到活化的PLGA納米微球(NP-COOR)。
　　 4、分別將過量NP與NP-COOR加入兩管等量NH2-LMB中，4℃孵育，12、24、36、48h后，取上層漂浮的乳液，在光鏡下觀察連接效果。
　　 結果：12、24h后，在光鏡下兩管微泡周圍都未見納米微球聚集。36h后，NP+NH2-LMB組脂質(zhì)微泡周圍未見納米微球的聚集；NP-COOR+NH2-LMB組部分脂質(zhì)微泡周圍可見少量納米微球聚集。48h后，光鏡下N