斑馬魚(yú)尾鰭再生中相關(guān)基因的表達(dá)及血根堿對(duì)其再生過(guò)程的影響.pdf

1、單位代碼10476學(xué)號(hào)1504183004。分類(lèi)號(hào)Q38IIllUIIIIIIIIIIIIII』一丫3437051河南衙軸大穿河南衙軸大學(xué)碩士學(xué)位論文斑馬魚(yú)尾鰭再生中相關(guān)基因的表達(dá)及血根堿對(duì)其再生過(guò)程。，的影晌，學(xué)科、專業(yè)研究方向申請(qǐng)學(xué)位類(lèi)別申請(qǐng)人指導(dǎo)教師：生物學(xué)遺傳學(xué)：動(dòng)物分子遺一傳學(xué)I理學(xué)碩士，：資靜雅’一：李莉副教授二。一八年五月摘要再生，即發(fā)育成熟的個(gè)體，受到機(jī)械或自然傷害后的組織，仍然存在在原有基礎(chǔ)上發(fā)育成完整個(gè)體的能力。與哺

2、乳動(dòng)物相反的是，硬骨魚(yú)魚(yú)鰭組織在剪鰭后具有很強(qiáng)的再生潛能，其尾鰭再生過(guò)程是研究組織再生分子基礎(chǔ)的一個(gè)重要模型。最近，斑馬魚(yú)作為組織或器官遺傳學(xué)研究的模式脊椎動(dòng)物而出現(xiàn)，對(duì)傷害的反應(yīng)，斑馬魚(yú)主要的鰭結(jié)構(gòu)再生的非常快，在剪鰭或損傷后，由各種再生相關(guān)基因表達(dá)引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)，使得丟失尾鰭結(jié)構(gòu)仍然能夠恢復(fù)到原來(lái)的大小。因?yàn)榛|(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix

3、，ECM)的降解和重塑有關(guān)，能夠影響細(xì)胞遷移，是細(xì)胞外基質(zhì)在健康、疾病、發(fā)育、再生過(guò)程中周轉(zhuǎn)的關(guān)鍵酶。所以，我們又對(duì)romp9和rompl3這兩個(gè)基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析，在NCBIGeneBank中，查找到mmp9cDNA序列全長(zhǎng)2801bp，其中102bp的57UTR區(qū)和656bp的37UTR區(qū)，ORF長(zhǎng)2043bp，編碼680個(gè)氨基酸序列，相對(duì)分子質(zhì)量是7658927Da，等電點(diǎn)pI為563。對(duì)蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)0l螺旋有145

4、個(gè)，占2132％，B轉(zhuǎn)角有77個(gè)，占1132％，無(wú)規(guī)則卷曲線圈有309個(gè)，占4544％mmpl3cDNA序列全長(zhǎng)1653bp。其中12bp的57UTR區(qū)和213bp的37UTR區(qū)，ORF長(zhǎng)1428bp，編碼475個(gè)氨基酸序列。相對(duì)分子質(zhì)量是5379201Da，等電點(diǎn)pI是597，對(duì)蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)0l螺旋111個(gè)，占2337％，B轉(zhuǎn)角44個(gè)，占926％，無(wú)規(guī)則卷曲線圈有199個(gè)，古4189％。對(duì)mmp9和mmpl3基因進(jìn)行qPCR

5、，發(fā)現(xiàn)在剪鰭后，這兩個(gè)基因表達(dá)量都顯著性增加。運(yùn)用原位雜交技術(shù)，對(duì)再生不同時(shí)期的斑馬魚(yú)尾鰭做冰凍切片，采用預(yù)先制備好的romp9和mmpl3基因正義和反義RNA探針進(jìn)行雜交，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：再生斑馬魚(yú)尾鰭中，romp9在剪鰭后再生第3天(3dpa)在骨骼前體細(xì)胞中表達(dá)，mmpl3在3dpa芽基中表達(dá)信號(hào)最強(qiáng)，4dpa時(shí)，表達(dá)信號(hào)減弱。另外，在GeneBank中查找另外13個(gè)再生相關(guān)基因的cDNA全長(zhǎng)序列，根據(jù)全長(zhǎng)序列設(shè)計(jì)熒光定量PCR特異引物