APACHEⅡ評分對ICU膿毒癥患者預(yù)后的評估及原花青素B1通過PI3K-AKT-NF-KB通路調(diào)節(jié)THP-1細(xì)胞炎癥反應(yīng)的研究.pdf

1、目的:膿毒癥(sepsis)是ICU工作者經(jīng)常面臨的棘手問題，由其導(dǎo)致的多臟器功能衰竭(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)已經(jīng)成為ICU危重癥患者主要的死亡原因。目前較多的研究表明原花青素，一種廣泛存在人們?nèi)粘ｏ嬍持械亩喾宇惢衔?，具有廣泛的抗炎作用，但其作用機(jī)制目前仍未有定論。急性生理與慢性健康狀態(tài)評分Ⅱ(APACHEⅡ)在世界范圍內(nèi)的ICU已廣泛使用，但國內(nèi)ICU扔暫時處于落后狀態(tài)，本

2、實驗通過收集本院急診ICU膿毒癥病例，進(jìn)行APACHEⅡ評分，探討其分值與死亡率的關(guān)系。細(xì)胞實驗使用LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞建立膿毒癥細(xì)胞模型，使用或不使用PI3k/akt通路抑制劑LY294002，再加用原花青素干預(yù)，比較不同處理組NF-KB活力及TNF-α的表達(dá)水平，探討原花青素的作用機(jī)制。
　　方法:臨床調(diào)查:收集本院ICU收住院的膿毒癥患者，篩除年齡小于15周歲，入院不足24小時及轉(zhuǎn)出ICU的患者，進(jìn)行APACHEⅡ評分，

3、討論其分值與膿毒癥患者病死率的關(guān)系，及對ICU膿毒癥患者預(yù)后評估的價值。細(xì)胞實驗:用人急性單核白血病細(xì)胞（THP-1 cells）進(jìn)行體外培養(yǎng)，使用10％胎牛血清+RPMI-1640作為培養(yǎng)基，培養(yǎng)環(huán)境為37℃，5％C02。細(xì)胞培養(yǎng)至對數(shù)期（濃度4-8×105/ml）即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)及藥物實驗。利用細(xì)胞藥物毒性實驗(CCK-8)，選擇安全高效的原花青素給藥濃度，排除藥物毒性對實驗結(jié)果的影響。分組對照加入適量原花青素B1干預(yù)的膿毒癥模型（

4、LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞）加或不加入PI3K/Akt通路抑制劑LY294002，用Western-blotting法測定NF-KB活力及ELISA法測定TNF-α、IL-6濃度。揭示原花青素緩解LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)與PI3K/akt/nf-kb通路的關(guān)系。收集實驗數(shù)據(jù)結(jié)果，并應(yīng)用SPSS22.0進(jìn)行統(tǒng)計描述，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)描述統(tǒng)計數(shù)據(jù)，統(tǒng)計單因素方差檢驗分析各組差異，當(dāng)P＜0.05時為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:AP

5、ACHEⅡ評分與ICU膿毒癥患者死亡率呈正相關(guān)。在CCK-8藥物毒性測試實驗下，發(fā)現(xiàn)原花青素B1在其濃度小于等于45μ g/ml時無法對THP-1細(xì)胞的活力造成毒性影響。而原花青素B1的濃度在大于45ug/ml的情況下(如90ug/ml，180ug/ml) THP-1的活力會下降。故選用原花青素B1濃度45ug/ml作為最適給藥濃度。在Western-blotting實驗對nf-kb蛋白活力的檢測以及使用ELISA法檢測不同實驗組中TN

6、F-α、IL-6的相對濃度中，發(fā)現(xiàn)原花青素B1可以顯著抑制膿毒癥細(xì)胞模型炎癥因子的表達(dá)，而在加入了PI3K/AKT抑制劑LY294002的膿毒癥細(xì)胞模型中，nf-kb、TNF-α、IL-6的表達(dá)進(jìn)一步被抑制。
　　結(jié)論:1.APACHEⅡ評分與ICU膿毒癥患者死亡率呈正相關(guān)，對國內(nèi)ICU膿毒癥患者預(yù)后評估有重要意義。
　　2.原花青素B1對THP-1的細(xì)胞毒性呈現(xiàn)濃度依賴的關(guān)系，在原花青素B1的濃度大于等于45ug/ml的時