雷帕霉素聯(lián)合抗CD34抗體復合支架置入后對血管內(nèi)皮細胞功能早期影響的研究.pdf

1、前言:
　　 藥物洗脫支架(Drug eluting stent，DES)通過程序性的釋放抗增殖藥物有效的抑制了支架置入后平滑肌細胞的過度增殖，顯著降低了BMS置入后的支架內(nèi)再狹窄率。然而，由于抗增殖藥物的毒性作用，DES在抑制內(nèi)膜增生的同時，也造成了血管“內(nèi)皮化延遲”(delayed endothelialization)現(xiàn)象及內(nèi)皮細胞功能障礙，進而導致支架內(nèi)晚期血栓（late stent thrombosis，LST）形成等

2、致命的并發(fā)癥。
　　 近年來，為了克服支架置入后造成的血管內(nèi)再狹窄缺點，很多新型支架被研制并逐步應用于臨床，包括無聚合物的藥物支架，生物可降解支架，抗體捕獲支架等。其中藥物聯(lián)合抗體技術(shù)復合支架被認為是一個有效可行的新方向:在藥物洗脫支架抑制內(nèi)膜過度增生的同時，在支架上涂覆抗體（CD34，CD133，或者是VEGFR-2等），利用抗原抗體結(jié)合反應原理，迅速吸附與捕獲外周血中的內(nèi)皮前體細胞，造血干細胞等到損傷血管局部位快速修復血管內(nèi)

3、皮，克服“內(nèi)皮化延遲”的難題。Granada等人的研究表明，藥物聯(lián)合生物捕獲技術(shù)復合支架可以在有效預防支架內(nèi)再狹窄。
　　 我們課題組將抗CD34抗體支架與藥物洗脫支架相結(jié)合(國家自然基金項目30770631)，研制出雷帕霉素聯(lián)合抗CD34抗體復合支架，實現(xiàn)了在抑制平滑肌細胞過度增生的基礎上，快速實現(xiàn)內(nèi)皮化的目標，并在臨床前的動物試驗中取得了滿意的效。但是，這種新型支架對是否造成了內(nèi)皮細胞功能障礙尚不明確，本研究利用掃描電鏡，免

4、疫組化和Western Blot等技術(shù)評價新型支架對血管內(nèi)皮細胞的早期影響。
　　 材料與方法:
　　 在12只小型巴馬豬（共12條冠狀動脈），隨機分為兩組SES-CD34+組與BMS組，采用國際上公認的小型豬冠狀動脈過度擴張的再狹窄模型，分別置入雷帕霉素CD34抗體復合支架（SES-CD34+）6枚，金屬裸支架(BMS)6枚。在14天時處死全部動物，取支架段血管標本，制作電鏡標本，以掃描電鏡觀察支架段血管內(nèi)皮細胞的形態(tài)

5、，利用圖形處理軟件計算支架置入段血管再內(nèi)皮化程度。小心移除血管段支架，以免疫組化對eNOS進行定位分析，以Western Blot來測定支架段血管內(nèi)皮細胞eNOS的表達程度，進行半定量分析，評估內(nèi)皮細胞功能。
　　 結(jié)果:
　　 1結(jié)構(gòu)完整性:支架置入后14天，電鏡結(jié)果顯示在SES-CD34+組與BMS組均已基本完成內(nèi)皮化(92±3％比86±8％，P＞0.05)，但是SES-CD34+組內(nèi)皮細胞形態(tài)不規(guī)則，連接不緊密。<