IL-17及相關細胞因子在ANIT致膽汁淤積性肝纖維化大鼠模型中的表達及意義.pdf

1、目的：研究IL-17A（interleukin-17,以下簡稱IL-17）及相關細胞因子在α-萘異硫氰酸酯（α-naphthalene isothiocyanate,ANIT）致膽汁淤積性肝纖維化大鼠模型肝臟、回腸組織中的表達及相互關系，探討其是否參與膽汁淤積性肝炎、肝纖維化的形成及腸黏膜屏障損傷。
　　方法：24只雄性遠交群（sprague dawley,SD）大鼠，體重180±30g,隨機分為三組：空白對照組、蓖麻油對照組及A

2、NIT實驗組，每組大鼠各8只?？瞻捉M不予任何處理；蓖麻油組予蓖麻油灌胃，5ml/kg體重，每周1次，共5次；ANIT組予2％的ANIT(蓖麻油配置)灌胃，100mg/kg體重或5m l/kg體重，每周1次，共5次。第5次灌胃48小時后處死各組大鼠。大鼠予20%烏拉坦麻醉后開腹，腹主動脈取血，檢測大鼠外周血中總膽紅素（TBil）、直接膽紅素（DBil）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、γ-

3、谷氨酰氨轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）、總膽汁酸（TBA）濃度；酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測外周血IL-17、I L-4及γ干擾素（interferon-gamma,IFN-γ）含量；蘇木素-伊紅（HE）染色觀察大鼠肝組織、回腸組織病理變化；Masson染色觀察肝組織纖維化改變；免疫組織化學染色測肝組織IL-17、IL-4及IFN-γ蛋白表達；實時熒光定量PCR法(reverse transcription-polymerase chain r

4、eaction,R T-PCR)測大鼠肝組織、回腸組織IL-17、IL-4及IFN-γmRNA的表達水平。
　　結果：⑴肝組織、回腸組織HE染色病理形態(tài)學示：空白組及蓖麻油組，肝小葉及匯管區(qū)結構正常，肝細胞無變性、壞死，匯管區(qū)無炎癥細胞浸潤，毛細膽管無膽汁淤積，無膽管及纖維組織增生；ANIT組匯管區(qū)擴大伴大量炎性細胞（淋巴細胞、漿細胞及嗜酸性粒細胞）浸潤，膽管增生，管腔內(nèi)可見壞死脫落細胞，膽管腔阻塞，膽管周圍纖維組織增生；空白組、

5、蓖麻油組及ANIT組回腸黏膜絨毛完整,上皮細胞排列整齊，無變性、壞死；肝組織Masson染色鏡下觀察可見ANIT組膽管周圍膠原纖維沉積。⑵肝組織免疫組織化學染色分析結果示：IL-17、IL-4及IFN-γ在ANI T組中的表達結果均為陽性；在空白組、蓖麻油組中的表達結果均為陰性。⑶對腹主動脈血行肝功能檢測，ANIT組ALT（437.42±156.37）u/L濃度明顯高于空白組（38.63±12.65）u/L及蓖麻油組（60.67±11.

6、48）u/L；A NIT組AST（492.42±179.89）u/L濃度明顯高于空白組（132.38±30.25）u/L及蓖麻油組（132.67±35.90）u/L；ANIT組γ-GT（13.33±5.12） u/L濃度明顯高于空白組（2.25±0.46）u/L及蓖麻油組（2.5±0.84）u/L；ANIT組ALP（862.79±279.12）umol/L濃度明顯高于空白組（256.25±89.83）umol/L及蓖麻油組（209.17

7、±49.37）umol/L；ANIT組TBil（147.53±23.35）umol/L濃度明顯高于空白組（0.52±0.12）umol/L及蓖麻油組（0.6±0.14）umol/L；ANIT組DBil（117.21±20.55）umol/L濃度明顯高于空白組（0.38±0.13）umol/L及蓖麻油組（0.47±0.12）umol/L；ANIT組TBA（226.19±26.82）umol/L濃度明顯高于空白組（16.38±5.04）um

8、ol/L及蓖麻油組（14.53±4.41）umol/L，差異均有統(tǒng)計學意義（p<0.01）。⑷ANIT組外周血IL-17含量（216.69±15.53）pg/ml高于空白組（112.25±15.82）pg/ml及蓖麻油組（111.53±8.28）pg/ml，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；ANIT組外周血IL-4含量（27.14±1.59）pg/ml稍高于空白組（26.68±0.26）pg/ml及蓖麻油組（26.74±0.25）pg/

9、ml，ANIT組外周血IFN-γ含量（25.53±8.45）pg/ml稍高于空白組（24.29±8.06）pg/ml及蓖麻油組（20.58±8.01）pg/ml，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。⑸ANIT組IL-17mRNA表達量（3.39±1.31）高于空白組（1.31±0.15）及蓖麻油組(1.30±0.25)，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；ANIT組肝組織IFN-γmRNA表達量(31.60±14.87)高于空白組(7.3

10、5±1.07)及蓖麻油組(6.87±0.62)，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；ANIT組IL-4mRNA表達量(4.19±1.31)比空白組（3.80±1.07）及蓖麻油組（3.52±0.77）稍高,差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。ANIT組回腸組織IL-17mRNA表達量（2.28±0.92）高于空白組（0.62±0.23）及蓖麻油組（0.57±0.09），IL-4mRNA的表達量（0.64±0.28）高于空白組（0.25±0.

11、10）及蓖麻油組（0.20±0.03），差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；IFN-γmRNA的表達量（6.18±2.84）高于空白組（2.33±0.73）及蓖麻油組（2.39±0.51），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　結論：①IL-17及IFN-γ可能通過發(fā)揮促炎、促纖維化作用參與大鼠膽汁淤積性肝炎、肝纖維化的形成；IL-4可能與大鼠膽汁淤積性肝炎、肝纖維化的形成無明顯相關性。②IL-17、IL-4及IFN-γ可能與大