?；撬岜Ｗo(hù)三氧化二砷引起的子代大鼠胰腺自噬性損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：砷是存在于自然界中的環(huán)境污染物之一。無機(jī)砷的暴露會(huì)引起很多慢性疾病的發(fā)生，比如糖尿病。而母體的高砷暴露對子代的影響更是引起了越來越多的關(guān)注。自噬是通過清除失調(diào)線粒體更新線粒體生物源，通過線粒體伴侶分子及線粒體水解酶管理線粒體蛋白質(zhì)量，從而達(dá)到健康線粒體數(shù)量的平衡的過程，然而自噬的失調(diào)會(huì)造成組織損傷，引起相關(guān)疾病。有研究表明，活性氧（ROS）的產(chǎn)生與砷引起的胰島素抵抗及糖尿病有很大關(guān)系。而轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子（Nrf2）是細(xì)胞

2、氧化應(yīng)激反應(yīng)中的關(guān)鍵因子，具有抗氧化作用，與機(jī)體的防御系統(tǒng)密切相關(guān)。本課題組已有研究證明砷可以引起大鼠肝臟的自噬性死亡，但其機(jī)制是否與Nrf2和Trx有關(guān)還需進(jìn)一步研究。牛磺酸是天然存在于自然界中的抗氧化物質(zhì)，但是否可以緩解砷誘導(dǎo)的胰腺損傷及其機(jī)制還不清楚。因此，本研究擬探討?；撬峥煞裢ㄟ^Nrf2-Trx通路干預(yù)砷引起的子代大鼠胰腺的自噬性損傷。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)以Wistar大鼠為研究對象，孕鼠暴露于濃度為2 mg/kg BW~

3、8 mg/kg BW的三氧化二砷（As2O3），及150 mg/kg BW濃度牛磺酸灌胃后，進(jìn)行8 mg/kg BW As2O3灌胃，至子代斷乳，后將子代大鼠繼續(xù)暴露于與母鼠相同劑量的As2O3至性成熟，共57天。對子代大鼠胰腺進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，觀察子代大鼠胰腺的形態(tài)；用電子顯微鏡觀察子代大鼠胰腺細(xì)胞中自噬體的形成情況，計(jì)數(shù)；用蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）檢測子代大鼠胰腺中Nrf2蛋白及自噬生物標(biāo)記物L(fēng)C3蛋白的

4、表達(dá)情況；用RT-PCR方法檢測子代大鼠胰腺中Trx基因的表達(dá)情況；利用MDA試劑盒測量胰腺組織中MDA的水平。
　　結(jié)果：HE染色結(jié)果顯示，隨著As2O3濃度的增加，子代大鼠胰腺細(xì)胞及胰島明顯縮小，而在牛磺酸保護(hù)組，子代大鼠胰腺細(xì)胞形態(tài)未見明顯異常；電子顯微鏡下可見，As2O3暴露后，子代大鼠胰腺中有自噬體形成，其數(shù)量隨著 As2O3濃度的升高而增多，?；撬岜Ｗo(hù)組自噬體增多不明顯；子代大鼠胰腺中LC3-II蛋白表達(dá)隨著As2O3

5、濃度的升高而增加，?；撬岜Ｗo(hù)組LC3-II蛋白表達(dá)較8mg/kg BW As2O3暴露組LC3-II蛋白的表達(dá)量減少；子代大鼠胰腺中Nrf2蛋白，Trx基因及MDA的水平隨著As2O3暴露劑量的升高而明顯減少，而在?；撬岜Ｗo(hù)組，其表達(dá)量較8 mg/kg BW As2O3暴露組蛋白表達(dá)量明顯上升。
　　結(jié)論：As2O3可引起的子代大鼠胰腺自噬性損傷；Nrf2-Trx的抑制造成As2O3引起的子代大鼠胰腺自噬性損傷；?；撬峥赏ㄟ^激活N