Mir-1271及RTEF-1在青年及老年胃癌中的表達及意義.pdf

1、背景與目的:
　　胃癌是我國胃腸道腫瘤中常見的惡性腫瘤，具有惡性程度高、易轉移和死亡率高的特點。因此，深入研究胃癌發(fā)病的機制從而尋找到新的早期診斷和有效的治療方法，是擺放在我國醫(yī)療工作者面前的重要問題。胃癌發(fā)病率隨患者年齡增加而升高，其發(fā)病高峰年齡為60歲左右。較之青年胃癌，老年胃癌患者表現(xiàn)出組織學分化程度高、生物學侵襲性弱、腫瘤惡性程度低的臨床特點。老年胃癌與青年胃癌在生物學行為上的這種差別提示兩組胃癌在各自的發(fā)病及發(fā)展過程中存

2、在著不同的分子調節(jié)機制。但是，目前尚不清楚是什么分子機制導致了老年胃癌具有相對低危的生物學特性。因此，研究老年和青年胃癌間存在的不同分子調節(jié)機制，有利于我們進一步深入了解胃癌發(fā)生、發(fā)展的過程，對于胃癌的個體化預防和治療具有重要的理論指導意義。
　　惡性腫瘤普遍具有高度異質性的特點，既往研究結果顯示：老年胃癌是胃癌患者中的一個主要患者群體，其臨床病理特征不同于青年胃癌，反映在：女性發(fā)病率顯著低、組織學分化程度高、生物學侵襲性弱、腫瘤

3、惡性度低等。且老年胃癌遺傳傾向低于青年胃癌，表現(xiàn)為有胃癌家族史的患者明顯較青年胃癌組低。分子學水平上，既往研究也發(fā)現(xiàn)老年胃癌及青年胃癌患者間的基因組譜差異，另外介導細胞黏附和維持細胞骨架的E-鈣黏素和β-Catein表達水平和標志著DNA錯配修復功能缺陷的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI）等也在兩組胃癌間存在著明顯的差異。但是，前期的研究多止步于觀察到上述差異，而缺少對其內在精確分子機制的研究。
　　RTEF-1(Related Trans

4、criptional Enhancer Factor-1，轉錄增強因子-1相關基因)來自轉錄增強子家族（Transcriptional Enhancer Factor,TEF）。1996年Stewart等人從心肌細胞中首次成功克隆并編碼，隨后其家族的其他成員被不斷發(fā)現(xiàn)。目前已知該家族成員包括四個：TEF-1, RTEF-1, DTEF-1和ETF，該家族擁有一個共同的高度保守的DNA結合域，可以結合到基因啟動子M-CAT原件上發(fā)揮其調節(jié)

5、作用。RTEF-1作為轉錄增強子家族重要的組成部分，既往的研究多集中于其在內皮細胞和血管生成中的調節(jié)作用。Che P等人既往的研究結果證實了Mir-125a-5p通過下調 RTEF-1可以導致老年小鼠血管生成障礙。鑒于血管生成和腫瘤的密切關系，近來 RTEF-1在腫瘤形成中的作用同樣引起了關注。我們提出假設：RTEF-1及相關調控因子在老年胃癌及青年胃癌中的表達是否存在差異，這種差異是否與老年胃癌和青年胃癌間的組織學分化程度、生物學侵襲

6、性及腫瘤惡性程度的不同有關。
　　目的：
　　探討RTEF-1及其上游調控基因在老年胃癌及青年胃癌中的表達是否存在差異及其意義。
　　材料與方法:
　　1.研究對象及標本采集：標本采集于鄭州大學第一附屬醫(yī)院胃腸外科2014年7月至2015年1月期間進行胃癌根治術的患者。納入標準：術前胃鏡病理提示為胃惡性腫瘤，計算機斷層掃描(computed tomography, CT)等檢查進行術前分期，提示患者可以行標準胃癌

7、根治術，術后病理證實為胃癌中的低分化腺癌，術前未進行化療，放療及中西醫(yī)結合等抗腫瘤治療。本實驗經(jīng)我院道德倫理委員會的批準，而且經(jīng)過患者知情同意并簽署知情同意書。
　　2.自 Microarray數(shù)據(jù)結果中分析老年胃癌和青年胃癌中存在差異表達的miRNAs；發(fā)現(xiàn)在老年胃癌及青年胃癌中表達存在明顯差異的miRNA，RT-qPCR驗證；
　　3.分別采用RT-qPCR、WesternBlot技術檢測RTEF-1在老年胃癌及青年胃癌

8、原代細胞中的mRNA蛋白水平表達并進行比較。
　　4．所有實驗結果數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0軟件進行分析。以P<0.05作為差異有統(tǒng)計學意義的檢驗標準。
　　結果:
　　1．mir-1271在老年胃癌和青年胃癌中均含量豐富且變化相對明顯;
　　2．老年胃癌細胞中RTEF-1蛋白表達較青年胃癌減少；
　　3．老年胃癌細胞中mir-1271表達是青年胃癌的3.2倍；
　　結論:
　　老年胃癌及青年胃