TLR4-MyD88的蛋白表達與AngⅡ誘導心肌肥厚關系的研究.pdf

1、目的研究TLR4/MyD88的蛋白表達與AngⅡ誘導心肌肥厚的關系
　　方法選取21只8-10周齡的C57BL/6雄性小鼠，隨機分為三組:正常對照組（簡稱對照組），心肌肥厚組（簡稱肥厚組），心肌肥厚藥物干預組（簡稱肥厚干預組），每組7只。三組均皮下埋植微滲透泵，其中對照組以1.3mg/Kg/day的速度連續(xù)泵入生理鹽水，肥厚組及肥厚干預組以1.3mg/Kg/day的速度連續(xù)泵入AngⅡ;期間對照組與肥厚組每周2次腹腔注射生理鹽水，

2、肥厚干預組每周2次腹腔注射TAK242。觀察4周后處死小鼠，低溫下快速取出心臟，置于提前預冷的生理鹽水中，輕柔擠出心腔內的血液，反復2-3次后無菌紗布吸干心臟水分，以心臟最寬處及心尖部為切點，將心臟分成3部分，其中心室上段用實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，RT-PCR)經(jīng)RNA提取，逆轉錄，cDNA擴增過程檢測β肌球蛋白重鏈(beta-myosin heavy chain，β-MHC)mRNA表

3、達;心室中段置于福爾馬林中固定，經(jīng)常規(guī)脫水，透明，包埋后石蠟切片用蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining，HE)觀察心肌細胞形態(tài);心尖部用蛋白免疫印跡(Western Blot，WB)經(jīng)蛋白質提取，電泳，轉膜，封閉，一抗孵育，二抗孵育，化學發(fā)光，顯影，定影過程檢測TLR4和MyD88的蛋白表達水平。數(shù)據(jù)均采用SPSS20.0軟件分析處理，P＜0.05表明差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果
　　1.

4、各組小鼠心肌細胞形態(tài)變化
　　肥厚組心肌細胞橫截面積明顯大于對照組（3710.21±378.45vs1804.35±310.18，P＜0.01），肥厚干預組小鼠心肌細胞橫截面積明顯小于肥厚組(3125.14±734.46vs3710.21±378.45,P＜0.01)。
　　2.各組心肌細胞β-MHC mRNA表達變化
　　肥厚組心肌細胞β-MHC mRNA表達水平高于對照組（P＜0.05），予TAK242干預后肥厚鼠

5、心肌細胞β-MHC mRNA表達受到抑制(P＜0.05)。
　　3.各組心肌細胞TLR4、MyD88的表達變化
　　肥厚組心肌細胞TLR4、MyD88的表達水平高于對照組(P＜0.05)，予TAK242干預后肥厚鼠心肌細胞TLR4、MyD88的蛋白表達水平降低（P＜0.05）。
　　結論
　　1.在AngⅡ誘導的心肌肥厚中，TLR4和MyD88的蛋白表達水平增高。
　　2.TAK242干預抑制TLR4和My