桿狀病毒誘導(dǎo)SL-1細(xì)胞凋亡過程中線粒體結(jié)構(gòu)變化和凋亡相關(guān)蛋白的定位.pdf

1、細(xì)胞凋亡是目前的研究熱點(diǎn)，二十世紀(jì)九十年代以來，與細(xì)胞凋亡相關(guān)的因子以及細(xì)胞凋亡的信號(hào)通路已逐漸清晰，特別是作為模式生物的線蟲、果蠅與哺乳動(dòng)物細(xì)胞等，然而桿狀病毒誘導(dǎo)昆蟲細(xì)胞凋亡的機(jī)制還十分模糊。我們以前的研究表明芹菜夜蛾核型多角體病毒(Anagrapha(Syngrapha)falifera multiple nuclearpolyhedrosis virus，AfMNPV)能誘導(dǎo)鱗翅目斜紋夜蛾(Spodoptera litura)S

2、L-1細(xì)胞凋亡，并發(fā)現(xiàn)凋亡過程中線粒體膜電位降低，用Western檢測(cè)到了線粒體蛋白細(xì)胞色素C從線粒體釋放至細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中，其凋亡路徑可能類似于與哺乳動(dòng)物細(xì)胞凋亡的線粒體通路。為了進(jìn)一步闡明AfMNPV誘導(dǎo)SL-1細(xì)胞凋亡的凋亡機(jī)制，本文擬探討AfMNPV誘導(dǎo)SL-1細(xì)胞凋亡過程中線粒體結(jié)構(gòu)變化以及凋亡相關(guān)蛋白的定位：
　　 1.AfMNPV誘導(dǎo)SL-1細(xì)胞凋亡過程中線粒體的超微結(jié)構(gòu)變化
　　 對(duì)AfMNPV誘導(dǎo)凋亡的SL

3、-1細(xì)胞線粒體進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn)：AfMNPV接種4小時(shí)可見SL-1細(xì)胞線粒體數(shù)量明顯增多，線粒體嵴發(fā)生破裂；8小時(shí)后線粒體腫脹、變圓，線粒體嵴減少且空泡化，其他細(xì)胞器、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)也發(fā)生明顯的變化；16小時(shí)后線粒體固縮，電子密度增大，體積減小數(shù)倍。
　　 2.凋亡相關(guān)蛋白的定位
　　 細(xì)胞色素C與Bax蛋白是哺乳動(dòng)物細(xì)胞凋亡線粒體途徑中的凋亡相關(guān)蛋白質(zhì)，正常細(xì)胞中Bax蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，細(xì)胞色素C定位于線粒體膜

4、。受到凋亡信號(hào)的刺激后，細(xì)胞色素C與Bax蛋白分別發(fā)生定位變化：Bax蛋白從細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)轉(zhuǎn)位插入線粒體膜，引起線粒體膜通透性的改變，從而導(dǎo)致細(xì)胞色素C從線粒體釋放至細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中。
　　 2.1細(xì)胞色素C的定位
　　 AfMNPV處理SL-1細(xì)胞，于28℃培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)4h、8h后用MitoTracker RedCMXRos標(biāo)記線粒體，隨后對(duì)細(xì)胞色素C進(jìn)行標(biāo)記，共聚焦顯微鏡照相，觀察細(xì)胞色素C的定位情況。研究表明對(duì)照(正常S

5、L-1細(xì)胞)中線粒體與細(xì)胞色素C共定位，病毒感染4h后，細(xì)胞色素C呈彌散狀態(tài)，與線粒體不能共定位，說明從線粒體釋放。
　　 2.1 Bax樣蛋白的定位
　　 AfMNPV處理SL-1細(xì)胞，于28℃培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)3h、6h后用線粒體染料標(biāo)記線粒體，隨后對(duì)Bax蛋白進(jìn)行標(biāo)記，共聚焦顯微鏡照相，觀察Bax樣蛋白的定位。研究表明，在正常細(xì)胞中，Bax樣蛋白彌散分布在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中，而AfMNPV處理SL-1細(xì)胞3h后Bax則與線粒