降低成人原代肝細(xì)胞免疫原性及其對(duì)細(xì)胞穩(wěn)定性的影響.pdf

1、目的：研究紫外線照射對(duì)成人原代肝細(xì)胞活率及膜電位的影響，通過混合淋巴細(xì)胞-肝細(xì)胞培養(yǎng)，探討紫外線照射降低成人原代肝細(xì)胞的免疫原性的可行性及穩(wěn)定性。
　　方法：收集我院肝膽外科切除肝組織手術(shù)標(biāo)本，診斷為肝臟良性病變（肝血管瘤、肝內(nèi)膽管結(jié)石等），采用灌注法獲得肝細(xì)胞;將實(shí)驗(yàn)肝細(xì)胞分為5個(gè)組，1個(gè)對(duì)照組(0 J/m2)及4個(gè)不同照射強(qiáng)度組（分別為200、350、550和750J/m2）。紫外燈功率固定，照射強(qiáng)度由照射時(shí)間調(diào)控，5組照射強(qiáng)

2、度所對(duì)應(yīng)的照射時(shí)間分別為0、2、4、6和8分鐘。各組分別于處理后培養(yǎng)的第1、3、5天進(jìn)行相關(guān)檢測(cè):臺(tái)盼藍(lán)拒染法和CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活率;熒光顯微鏡和多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞膜電位變化;通過混合淋巴細(xì)胞-肝細(xì)胞培養(yǎng)（MLHC）檢測(cè)受體T細(xì)胞增值情況;收集實(shí)驗(yàn)組和處理組的培養(yǎng)上清液，離心后全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)白蛋白、LDH的分泌量。
　　結(jié)果：⑴改良的兩步膠原酶灌注獲得的肝細(xì)胞透亮，呈圓形或球形，胞質(zhì)均勻，肝細(xì)胞總數(shù)可達(dá)109個(gè)以上，活

3、率大于90％。⑵UVB照射新鮮分離的肝細(xì)胞，在照射強(qiáng)度相同的條件下，隨著照射后培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，成人原代肝細(xì)胞活率呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。照射后第1天活率最好，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，活率下降，到第五天，活率下降1/2;在照射后培養(yǎng)時(shí)間相同的情況下，隨著照射強(qiáng)度的增加，肝細(xì)胞活率呈先上升后降低。照射2min后的肝細(xì)胞活率最高，較未照射組高，但差異不明顯，活率明顯高于4min、6min組，是照射8min組的2倍。⑶不同的UVB照射強(qiáng)度和UVB照射后不同培

4、養(yǎng)時(shí)間之間，成人原代肝細(xì)胞的膜電位均有明顯差異。UVB照射2min組的膜電位在照射后的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均比UVB照射肝細(xì)胞0min、4min、6min、8min組的膜電位高。⑷肝細(xì)胞在接受不同強(qiáng)度紫外線照射后，與淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)，照射后的肝細(xì)胞免疫原性下降，表現(xiàn)為共培養(yǎng)的淋巴細(xì)胞增值能力下降。2min組與對(duì)照組無明顯區(qū)別，但明顯低于4min、6min、8min組。⑸檢測(cè)不同照射強(qiáng)度、培養(yǎng)時(shí)間的白蛋白、LDH分泌量，接受2min紫外線照射的肝細(xì)