自噬在機械通氣所致大鼠呼吸機相關性肺損傷中的作用及意義.pdf

1、本文主要從以下幾方面展開論述：
　　第一部分:大鼠機械通氣所致呼吸機相關性肺損傷模型的建立。
　　目的：
　　建立大鼠機械通氣所致相關性肺損傷的動物模型，研究不同潮氣量機械通氣對大鼠肺組織的影響情況。
　　方法：
　　健康雄性SPF級SD大鼠30只，周齡7周，體重(220±20g)，實施麻醉和氣管切開術后分別接受不同潮氣量(VT)的通氣(通氣時間均為4h)。隨機分為以下3組:對照組（A組，僅行氣管插管并保留

2、自主呼吸）;常規(guī)通氣組（B組，VT=10ml/kg）;損傷通氣組(C組，VT=40ml/kg)。A組在氣管插管后即刻，其他組在機械通氣結束后放血處死動物，計算肺濕/干比重比值（W/D比值），HE染色觀察肺組織病理學變化。
　　結果：
　　在大潮氣量機械通氣4h后，光鏡下病理學檢查結果顯示A、B組病理形態(tài)大致正常，C組肺組織中可見肺泡間隔增寬，肺泡腔滲液明顯增加，其內可見炎性細胞浸潤并有大量散在出血點;與A、B相比，C組肺組織

3、W/D比值明顯增加(P＜0.05)。
　　結論：
　　大潮氣量機械通氣能夠誘導大鼠呼吸機相關性肺損傷的發(fā)生，通過肺組織濕干比重和肺組織病理學檢查提示復制大鼠呼吸機相關性肺損傷動物模型成功。
　　第二部分:自噬在機械通氣所致大鼠呼吸機相關性肺損傷過程中的作用及意義。
　　目的：
　　評價機械通氣相關性所致肺損傷(VILI)過程中自噬相關蛋白Beclin1、LC3和炎癥相關因子NF-κB表達的意義。
　　

4、方法：
　　健康雄性SPF級SD大鼠30只，周齡7周，體重（200-250g），實施麻醉和氣管插管術后分別接受不同潮氣量(VT)的通氣（通氣時間均為4h）。隨機分為以下3組:對照組（A組，僅行氣管插管并保留自主呼吸）;常規(guī)通氣組(B組，VT=10ml/Kg);損傷通氣組(C組，VT=40ml/Kg)。A組在氣管插管并自主呼吸4h后，其他組在機械通氣結束后放血處死動物，計算BALF中白細胞計數(WBC)和總蛋白含量，ELISA試劑盒

5、檢測BALF中炎癥因子TNF-α和IL-1β的含量，使用MPO、SOD及MDA試劑盒檢測肺組織勻漿中相應指標的表達水平，Western Blot法檢測肺組織中自噬相關基因Beclin1、LC3及NF-κB的表達水平。
　　結果：
　　在大潮氣量機械通氣4h后，肺組織中總蛋白含量、白細胞計數和MPO、MDA等指標均顯著增加(P＜0.05)，SOD含量明顯降低(P＜0.05);肺組織中Beclin1、LC3、NF-κB表達水平均