3-MA作用的內(nèi)皮祖細(xì)胞在大鼠深靜脈血栓中增殖情況的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察用3-MA(3-methlyadenine，3-MA，3-甲基腺嘌呤)作用的內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)在大鼠深靜脈血栓中的增殖情況，為慢性深靜脈血栓的治療提供一種新的思路。
　　 方法：1.Ficoll法分離Wistar大鼠的骨髓單個(gè)核細(xì)胞(bone marrow-derivedmononuclear cells，BMMNCs)，EGM-2MV培養(yǎng)基誘導(dǎo)、培養(yǎng)、擴(kuò)增

2、骨髓源性EPCs并鑒定。倒置顯微鏡觀察、MTT法檢測(cè)EPCs增殖情況。2.結(jié)扎大鼠腎下段下腔靜脈建立深靜脈血栓模型，隨機(jī)分成四組，每組15只。3.分組。A組：空白對(duì)照組，注射1ml培養(yǎng)基；B組：注射1ml含有105個(gè)EPCs的細(xì)胞懸液；C組：注射1ml濃度為5mmol/L的3-MA；D組：注射1ml含有105個(gè)EPCs的細(xì)胞懸液，注射前EPCs與5mmol/L的3-MA混合培養(yǎng)6h。4.應(yīng)用Western blot檢測(cè)第14天各組血栓內(nèi)

3、自噬微管相關(guān)蛋白LC3Ⅱ、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)的蛋白表達(dá)。5.采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：1.Ficoll法分離的大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)EGM-2MV培養(yǎng)基培養(yǎng)可在體外誘導(dǎo)分化為EPCs。2.下腔靜脈血栓模型構(gòu)建成功，腎下段下腔靜脈結(jié)扎法構(gòu)建血栓模型成功率高。3.Western blot結(jié)果顯示：①A、B、C、D四組LC3Ⅱ蛋白均有表達(dá)，C組、D組較A組、B組明顯下

4、調(diào)(P<0.05)；B組和A組、D組和C組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②A、B、C、D四組VEGF蛋白均表達(dá)，B組和D組較A組和C組表達(dá)明顯上調(diào)，D組蛋白表達(dá)較B組高(P<0.05)；C組和A組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。③A、B、C、D四組bFGF蛋白，B組和D組較A組和C組表達(dá)明顯上調(diào)，D組蛋白表達(dá)均較B組高(P<0.05)；C組和A組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：將3-MA作用的EPCs移植到血栓模型后，EPCs的增殖能力提高，