阿奇毒素對髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(TREM-1)的影響及對膿毒血癥的預(yù)后價(jià)值.pdf

1、目的：研究TREM-1對LPS誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)的影響(細(xì)胞水平及動(dòng)物模型)，及膿毒血癥小鼠模型中，對其肺組織病原體的清除作用：研究阿奇霉素對TREM-1受體的調(diào)節(jié)。
　　 方法：
　　 1.培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，分為：LPS組、LPS+TREM-1/Fc融合蛋白組、LPS+阿奇霉素組。收集4h、8h、12h、24h、48h時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞及上清液，ELISA方法檢測上清液中sTREM-1、TNF-α、IL-6、IL-1β濃度；流式

2、細(xì)胞儀及Western blot檢測膜受體TREM-1的表達(dá)；RT PCR檢測TREM-1的基因表達(dá)。2.LPS動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，雄性S/D大鼠分為：對照組、阿奇霉素組、TREM-1/Fc融合蛋白組。觀察小鼠的生存時(shí)間、存活數(shù)量及存活狀態(tài)(觀察其活動(dòng)、精神狀態(tài)及進(jìn)食情況等)；每天抽取存活小鼠尾靜脈血液，用ELISA方法檢測血清中sTREM-1、TNF-α、IL-6、IL-1β濃度。在第三天，處死存活大鼠，通過肺組織大體病理標(biāo)本、HE染色，了解

3、肺組織的炎癥損害程度。3、綠膿桿菌大鼠模型中，分為對照組和TREM-1/Fc融合蛋白組。觀察大鼠的生存情況及生存時(shí)間，3天后處死大鼠，同只大鼠的部分肺組織給予HE染色，了解病理改變；另一部分肺組織液氮凝固下碾磨、低速離心，取上清液通過MTT方法測定細(xì)菌數(shù)量；并培養(yǎng)于血瓊脂培養(yǎng)基，觀察菌落，細(xì)菌鑒定。
　　 結(jié)果：
　　 1、流式細(xì)胞儀及Western blot結(jié)果示，TREM-1/FC融合蛋白和阿奇霉素可抑制LPS誘導(dǎo)下

4、TREM-1的蛋白表達(dá)，以前者為甚；對其基因表達(dá)無明顯作用。兩者均可抑制炎性反應(yīng)程度，減少炎性因子的釋放，與LPS組比較，sTREM-1、TNF-α、IL-6、IL-1β均有顯著差異(P<0.01)，其中以TREM-1的特異性抑制物TREM-1/FC融合蛋白為甚，它與阿奇霉素組比較sTREM-1有顯著差異(P<0.01)，TNF-α、IL-1β及IL-6(P<0.05)。2、LPS大鼠模型中，TREM-1/Fc融合蛋白組的存活率高于其他

5、兩個(gè)作用組，其中對照組最長生存時(shí)間約26小時(shí)，72小時(shí)內(nèi)死亡率100％，生存率0％，TREM-1/FC融合蛋白組生存率最高、生存時(shí)間最長(72小時(shí)內(nèi)生存率53.3％)，阿奇霉素組位于兩者之間(72小時(shí)內(nèi)生存率31.3％)；對血清炎性因子作用，TREM-1/Fc融合蛋白強(qiáng)于阿奇霉素，其中sTREM-1、TNF-α(P<0.01)，IL-6、IL-1β(P<0.05)，但兩者與對照組比較炎性因子釋放明顯減弱，均有顯著差異(P<0.01)；肺

6、組織病理改變方面，對照組肺組織明顯受損，失去正常結(jié)構(gòu)，大量炎性細(xì)胞向肺間質(zhì)浸潤、聚集，肺泡壁明顯增厚，部分肺泡間隔遭破壞，部分肺泡腔內(nèi)可見液體滲出。阿奇霉素組中可見較多炎性細(xì)胞浸潤，但較對照組明顯減少，肺泡結(jié)構(gòu)較完整，保持較為正常結(jié)構(gòu)，但欠光滑，部分肺泡壁輕度增厚。TREM-1/FC融合蛋白組肺間質(zhì)中可見少許炎性細(xì)胞浸潤，肺泡組織結(jié)構(gòu)基本正常，肺泡壁較光滑。可見，后兩組的病理炎性改變較對照組明顯減輕，其中以TREM-1/FC融合蛋白組為

7、甚。3、綠膿桿菌大鼠模型中，TREM-1/FC融合蛋白組生存率和生存時(shí)間均較對照組有明顯提高(前者最短生存時(shí)間為16小時(shí)，后者為10小時(shí)；前者72小時(shí)內(nèi)生存率43.6％，后者72小時(shí)內(nèi)生存率12.5％)；肺組織病理切片HE染色示，對照組肺組織失去正常結(jié)構(gòu)，大量炎性細(xì)胞向肺間質(zhì)浸潤、聚集，肺泡結(jié)構(gòu)遭嚴(yán)重破壞，含氣的肺泡被滲出的炎性細(xì)胞及液體所占據(jù)；FC組中可見較多炎性細(xì)胞浸潤，但較對照組明顯減少，肺泡壁增厚，欠光滑，部分肺泡間隔遭破壞，但

8、結(jié)構(gòu)較完整；FC組肺組織病理改變較對照組明顯減輕。FC組肺組織的病原體負(fù)荷較對照組明顯減少。
　　 結(jié)論：TPEM-1受體的抑制可減少LPS誘導(dǎo)下的炎性因子釋放，減輕組織病變程度，延長個(gè)體生存時(shí)間，改善預(yù)后；且其抑制并未完全喪失病原體的清除功能，仍可減少組織的病原體負(fù)擔(dān)，故此受體對炎性反應(yīng)有較為重要的調(diào)控意義，并可改善膿毒血癥的預(yù)后，是一個(gè)較為理想的調(diào)控受體。阿奇霉素對LPS誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)有較為肯定的調(diào)控作用，減少炎性因子的釋放