小鼠胚胎序貫培養(yǎng)與傳統(tǒng)培養(yǎng)的對(duì)比研究.pdf

1、目的：觀察小鼠胚胎在幾種傳統(tǒng)培養(yǎng)基和序貫培養(yǎng)基中的發(fā)育情況，探討序貫培養(yǎng)在小鼠胚胎體外培養(yǎng)中的優(yōu)勢，旨在進(jìn)一步優(yōu)化小鼠體外胚胎培養(yǎng)條件，提高制作轉(zhuǎn)基因小鼠的效率，改良核移植后胚胎培養(yǎng)環(huán)境。 方法：獲取小鼠受精卵，選取形態(tài)較好，核質(zhì)均一的受精卵備用。分別放在幾種傳統(tǒng)培養(yǎng)基如單一鉀最佳化培養(yǎng)基(KSOM)、小鼠輸卵管液培養(yǎng)基(MTF)、添加糖成分的Chatot-Ziomek-Bavister培養(yǎng)基(CZB+G)和序貫培養(yǎng)基G1/G

2、2分別培養(yǎng)，其中G1/G2序貫培養(yǎng)的胚胎3天后由G1轉(zhuǎn)移到G2中。為了比較G1/G2序貫培養(yǎng)和單獨(dú)培養(yǎng)的差別，取部分受精卵在G1和G2中分別全程培養(yǎng)。觀察小鼠在不同培養(yǎng)基中的四細(xì)胞、桑椹胚、囊胚形成率，觀察所形成囊胚的細(xì)胞計(jì)數(shù)，觀察發(fā)育過程中胚胎的凋亡情況。 結(jié)果：G1/G2序貫培養(yǎng)的胚胎較KSOM，MTF，CZB+G培養(yǎng)基的桑椹胚、囊胚形成率高，有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；KSOM，CZB+G，G1/G2三者之間的4細(xì)胞形成率無顯著

3、性差異；G1/G2序貫培養(yǎng)的胚胎桑椹胚、囊胚形成率顯著高于G1、G2單獨(dú)培養(yǎng)；G1/G2序貫培養(yǎng)形成的囊胚其細(xì)胞計(jì)數(shù)較KSOM和CZB+G高，有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；在幾種傳統(tǒng)培養(yǎng)基中，CZB+G培養(yǎng)基的桑椹胚、囊胚形成率顯著高于KSOM，MTF；在CZB+G和G1/G2序貫培養(yǎng)基中，其凋亡胚胎數(shù)之間無顯著性差異。 結(jié)論：小鼠胚胎的G1/G2序貫培養(yǎng)明顯優(yōu)于KSOM，MTF，CZB+G和G1，G2單獨(dú)培養(yǎng)。序貫培養(yǎng)可能是更適合小鼠