廣西豬繁殖與呼吸綜合征病毒ORF3基因克隆及分子流行病學(xué)調(diào)查研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的一種以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道疾病為特征的傳染病。該病自發(fā)現(xiàn)以來給世界各國養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。2006年夏秋之季，我國部分地區(qū)發(fā)生豬“高熱病”疫情，對養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失，發(fā)現(xiàn)了高致病性豬繁殖與呼吸綜合征變異病毒，證實疫情主要是由該病毒引起的。 本研究通過RT-PCR技術(shù)對2006月年至2008年2月送檢的56份病料進(jìn)行PRRSV檢測，結(jié)果30份為陽性，陽性率

2、達(dá)54％。本實驗對這30份陽性病料作為研究對象，根據(jù)北美洲株ATCC-VR2332和中國標(biāo)準(zhǔn)株CH-1a的序列利用Primer設(shè)計—對針對ORF3基因的特異性引物GP3-1/GP3-2，通過RT—PCR擴(kuò)增出約900bp的基因片段，與預(yù)期的目的片段大小相符。將其插入克隆載體質(zhì)粒pMD18-T。構(gòu)建重組質(zhì)粒，對克隆的ORF3基因進(jìn)行序列測定，測序結(jié)果顯示ORF3基因全長765bp。包含完整的ORF3基因的開放閱讀框架，編碼254個氨基酸。

3、將ORF3基因序列與VR-2332、FJ04A、JXA1、HuN、LV、VR2332、RespPRRS MLV和CH-1a的ORF3基因進(jìn)行同源性比較，結(jié)果顯示，30份毒株的ORF3基因序列之間的核苷酸同源性為90.8％～99.9％，推導(dǎo)編碼的氨基酸序列之間的同源性為92.6％～100％；與VR-2332、FJ04A、JXA1、HuN、LV、RespPRRS MLV和CH-1a株的核苷酸同源性分別為87.9～90.0％、89.4％～90

4、.7％、92.1％～99.7％、91.95～99.4％、40.7％～41.2％、88.2％～89.6％、93.1～96.7％。與VR-2332、FJ04A、JXA1、HuN、LV、RespPRRS MLV和CH-1a株推導(dǎo)編碼的氨基酸序列之間的同源性分別為90.2～92.5％、91.3％～93.8％、93.0％～99.7％、93.8％～99.6％、54.9％～56.9％、90.2％～92.5％、95.9～97.6％。表明國內(nèi)流行毒株的O

5、RF3基因區(qū)域變異較大，證實30份毒株均屬美洲型。 把30株流行毒株與國內(nèi)外已發(fā)表的48株P(guān)RRSV相應(yīng)序列進(jìn)行比較，并建立了遺傳進(jìn)化樹。本研究獲得的30株流行毒株均屬于3個亞群中的亞群Ⅱ，并且ORF3基因序列的同源性和2006至2007年“高熱病”期間分離得到的國內(nèi)代表株較高，達(dá)到了97.7％～99.7％。 推導(dǎo)編碼氨基酸的比較結(jié)果表明，分屬于不同亞群的廣西不同地區(qū)流行的PRRSV毒株在ORF3基因編碼蛋白的潛在糖基化