鈣與鈣調素在粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）細胞周期中的作用.pdf

1、該實驗室利用一株營養(yǎng)缺陷型菌株MFP7(h<'->,adel-D25,ade6-M210,S65T-GFP∷caml<'+>,leu1-32,ura4-D18),通過觀察細胞內GFP-CaM的熒光強度以分析胞內CaM的濃度及分布變化.該文發(fā)現(xiàn)增加胞外鈣濃度以及低濃度(20~100 μmol/L)三氟拉嗪(TFP)不但能促進野生型S.pombe細胞的增殖,而且對MFP7菌株也有同樣的效應,這說明胞外Ca<'2+>和低濃度TFP對不同遺傳型

2、裂殖酵母細胞的增殖均有促進作用.我們首次采用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察的方法,以Fluo-3負載S.pombe細胞,熒光強度反映胞質游離Ca<'2+>濃度.該文還對用1、5、10mmol/L外Ca<'2+>,5mmol/L EGTA,100 μmol/L TFP及缺氮同步化處理的MFP7細胞內GFP-CaM的熒光強度的變化進行了觀測.缺氮培養(yǎng)可以將粟酒裂殖酵母細胞生長同步化在細胞周期的G<,1>期,G<,1>期的細胞為單倍體(DNA含量為

3、1C),細胞流式法對細胞DNA相對含量的測定結果表明在48Channel處,而對數(shù)期細胞DNA熒光強度的相對值分別在48channel和92channel處,細胞流式法測定發(fā)現(xiàn)同步化于G1期的細胞中GFP-CaM的表達量明顯高于正常生長的對數(shù)期細胞.EGTA處理和同步化實驗的結果表明,胞內CaM的表達在G1晚期開始上升到較高的水平.在激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察不同周期時相裂殖酵母細胞中CaM的濃度及分布變化,結果表明,分裂期細胞總體熒光