人參總皂苷改善放射所致骨髓造血細(xì)胞衰老損傷的作用研究.pdf

1、經(jīng)化療或輻射(IR)的許多病人將繼發(fā)急性或長期(永久性)的骨髓損傷從而限制癌癥治療成功和影響生活質(zhì)量。急性骨髓抑制是由快速增殖的造血祖細(xì)胞(HPCs)凋亡所致，而對靜止?fàn)顟B(tài)的造血干細(xì)胞(HSCs)影響較小，臨床上通過應(yīng)用造血生長因子能夠進(jìn)行成功治療；相反，長期的骨髓損傷主要?dú)w因于HSC內(nèi)在損傷導(dǎo)致的HSC自我更新能力喪失。因此，保護(hù)、提高HSC自我更新能力是開發(fā)新型抗骨髓抑制藥物的核心。目前絕大多數(shù)化學(xué)合成的骨髓抑制保護(hù)劑由于其內(nèi)在的毒

2、性而限制了臨床應(yīng)用，從天然草本植物如人參中提取的有效活性成分，由于它們明顯的保護(hù)作用卻低毒性而備受關(guān)注，成為當(dāng)今篩選抗骨髓抑制藥物的重要來源。
　　人參是祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的“補(bǔ)氣”要藥，人參總皂苷(TSPG)是人參中主要的有效藥物成分。我們前期研究表明：人參總皂苷是一種適應(yīng)原性藥物，具有雙向調(diào)節(jié)作用，既可抑制白血病細(xì)胞增殖，又可誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡和向較成熟細(xì)胞分化；又能促進(jìn)造血干/祖細(xì)胞增殖分化及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、誘導(dǎo)造血生長因子基因表達(dá)等

3、。目前人參總皂苷對放射損傷骨髓造血細(xì)胞衰老作用的研究及機(jī)制尚未明確。
　　實(shí)驗(yàn)分兩部分：1.放射致小鼠骨髓造血細(xì)胞損傷與衰老模型的建立；2.人參總皂苷改善放射損傷骨髓造血細(xì)胞衰老的作用。本課題主要研究人參總皂苷對放療引起的骨髓造血干/祖細(xì)胞衰老的影響，為人參的臨床應(yīng)用提供理論與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　一.放射致小鼠骨髓造血細(xì)胞損傷與衰老模型的建立
　　目的：
　　建立放射致小鼠骨髓造血細(xì)胞損傷與衰老模型，為進(jìn)一步篩選抗輻

4、射藥物奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.取50只C57BL/6小鼠，隨機(jī)分為對照組和照射組，照射組又分為4Gy、6.5Gy、8.5Gy和10.5Gy不同劑量組，觀察各組照射后30天存活率。
　　2.另取20只C57BL/6小鼠，6.5Gy照射后分別于第1天、第3天、第7天和第30天檢測小鼠的外周血、骨髓單個(gè)核細(xì)胞(MCNs)數(shù)、骨髓造血細(xì)胞集落生成單位(CFU)的形態(tài)及數(shù)量、骨髓單個(gè)核細(xì)胞的凋亡情況、β-半乳糖苷酶衰老(

5、SA-β-gal)染色、細(xì)胞免疫熒光分析p16Ink4a蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.30天存活率：對照組和4Gy組為100％；6.5Gy組為80％；8.5Gy及10.5Gy組均為0％。
　　2.6.5Gy一次性全身照射后第1天、第3天、第7天、第30天的外周血白細(xì)胞和血小板、骨髓單個(gè)核細(xì)胞數(shù)、CFU數(shù)量均下降，以照射后第3天最明顯，第7天已開始恢復(fù)。
　　3.流式細(xì)胞術(shù)凋亡測定結(jié)果顯示，照射后凋亡率升高

6、，第3天最高達(dá)35.71±0.30(對照組為7.32±1.87)，隨時(shí)間的延長凋亡率逐漸下降。
　　4.SA-β-gal染色和p16Ink4a細(xì)胞免疫熒光染色均顯示，陽性細(xì)胞率以第3天最高，隨時(shí)間延長逐漸降低。
　　結(jié)論：
　　以6.5Gy照射C57BL/6小鼠致死率低，可引起較明顯的骨髓造血細(xì)胞損傷與衰老。
　　二.人參總皂苷改善放射所致骨髓造血細(xì)胞衰老的作用
　　目的：
　　探討人參總皂苷(TSP

7、G)抗放射(6.5Gy)損傷骨髓造血細(xì)胞衰老的作用。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)分組及處理方法分為：對照組；IR組；T50組；T200組。先給藥3天，然后照射，照射后繼續(xù)給藥7天，7天后檢測各個(gè)指標(biāo)的變化情況。
　　2.各組小鼠經(jīng)上述方法處理后，檢測外周血的變化情況；計(jì)數(shù)各組骨髓單個(gè)核細(xì)胞數(shù)、骨髓造血細(xì)胞集落生成單位(CFU)的數(shù)量、觀察形態(tài)變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測周期變化；β-半乳糖苷酶衰老(SA-β-gal)染色檢測細(xì)胞

8、陽性率，細(xì)胞免疫熒光分析p16Ink4a蛋白的表達(dá)水平等。
　　結(jié)果：
　　1.與IR組比較，給藥處理后，T50組對白細(xì)胞的作用不明顯，而T200組的白細(xì)胞數(shù)明顯增加，但各組之間紅細(xì)胞與血小板均無明顯變化。
　　2.與IR組比較，T50組單個(gè)核細(xì)胞數(shù)、集落個(gè)數(shù)均有少量增加，而T200組對照射后單個(gè)核細(xì)胞數(shù)及集落個(gè)數(shù)均明顯增加。
　　3.與IR組比較，T50組與T200組細(xì)胞周期G1期細(xì)胞比例隨藥物濃度增加有減少的