紫紅獐牙菜抗HBV和NIDDM活性物質與資源品質研究.pdf

1、紫紅獐牙菜Swertia punicea Hemsl.為龍膽科(Gentianaceae)獐牙菜屬(Swertia L.)植物，在我國，民間應用紫紅獐牙菜入藥的歷史悠久，該植物已被民間用于治療急性黃疸型肝炎、膽囊炎、肺炎、流感、骨髓炎等疾病。據(jù)報道，本屬印度獐牙菜和日本獐牙菜具有明顯的抗糖尿病作用。本課題對紫紅獐牙菜的活性物質和資源質量的評價進行了研究。
　　 首先，為闡明紫紅獐牙菜抗乙肝病毒活性物質基礎，本研究對紫紅獐牙菜進行

2、了系統(tǒng)的藥理和化學成分研究。
　　 本研究采用乙肝病毒基因組轉染的人肝癌細胞（Hep G2）2,2,15細胞為細胞模型，對紫紅獐牙菜各個不同極性部位進行了活性篩選。紫紅獐牙菜乙醇提取物和其乙酸乙酯部位對HBsAg和HBeAg的表達表現(xiàn)出了明顯的抑制作用，證實了紫紅獐牙菜具有抗HBV作用，并確定乙酸乙酯部位為活性部位。
　　 本研究通過系統(tǒng)的化學成分研究，從紫紅獐牙菜中分離并鑒定了20個單體化合物。其中Comp. 18 (

3、1-hydrate，3-deoxy-α-D-tagatofuranose)為新化合物，Comp.16 (Campestroside)、17 (Uridine)首次從該植物中分離得到，Comp.12 (7-[(β-D-xylopyranosyl)oxy]-1,8-dihydroxy-3-methoxyxanthone)、13(Norswertianolin)、14 (Tetrahydrosertianolin)、15 (8-hydroxy

4、-10-hydrosweroside)為首次從該屬植物分離得到。
　　 本研究對紫紅獐牙菜活性部位中分離得到的單體化合物和其他含量較大的化合物采用相同模型進行了體外抗乙肝病毒活性篩選。實驗結果表明：Comp. 2、5、10對HBsAg有抑制作用，選擇指數(shù)（SI）分別為1.2、14.2、6.8；Comp. 7、8、9、11對e抗原有抑制作用，選擇指數(shù)（SI）分別為4.5、6.2、6.9、2.4。
　　 另一方面，為了闡明紫

5、紅獐牙菜抗糖尿病活性的物質基礎，本實驗利用高脂高糖飼料+STZ誘導的2型糖尿病小鼠為模型，對紫紅獐牙菜各提取部位和部分化學成分進行了活性的篩選。并對得到的活性成分抗糖尿病活性的可能機制進行了探討。
　　 本研究采用正常BABL/c小鼠和小劑量STZ加以高脂飼料誘導的高血糖BABL/c小鼠，對紫紅獐牙菜中的部位進行了抗高血糖藥理活性篩選。從紫紅獐牙菜中分離出乙醚、乙酸乙酯、正丁醇及水溶性四個不同極性部位，測定給予上述四個部位后小鼠

6、的空腹血糖、糖耐量和胰島素抵抗指數(shù)，篩選活性部位。結果表明乙酸乙酯部位為主要的降血糖活性部位，其抗糖尿病的可能機制為改善胰島素抵抗。
　　 本研究對從乙酸乙酯部位分離得到的兩個含量較高的口山酮化合物Methylswertianin和 Bellidifolin采用STZ＋高脂飼料誘導的高血糖小鼠進行了進一步的活性篩選。結果表明Methylswertianin和 Bellidifolin高低劑量組均能明顯降低STZ引起的高血糖小鼠的

7、血糖。Methylswertianin和Bellidifolin各劑量組小鼠在口服葡萄糖1小時內血糖水平迅速升高，1小時以后血糖水平開始迅速下降，表明Methylswertianin和Bellidifolin明顯提高了糖尿病小鼠的糖耐受能力。Methylswertianin和Bellidifolin的各劑量組中血漿的TC和LDL濃度與模型組比較都明顯的降低(P<0.01)，TG濃度在Methylswertianin高低劑量組和Belli

8、difolin高劑量組也表現(xiàn)出明顯的降低(P<0.01)。同時，Methylswertianin和Bellidifolin的高劑量組的HDL濃度也有所降低(P<0.05)。但是Methylswertianin和Bellidifolin各劑量組的相對HDL水平與模型對照組比較都有很明顯的提高，甚至高過了Rosiglitazone對照組。Methylswertianin和Bellidifolin均有顯著緩解胰島素抵抗作用，通過對胰島素指數(shù)的

9、計算，發(fā)現(xiàn)各實驗組對高血糖小鼠的胰島素抵抗均有非常顯著作用（P<0.01）。
　　 本實驗在對Methylswertianin和 Bellidifolin抗糖尿病活性機制研究中發(fā)現(xiàn)，Methylswertianin和 Bellidifolin能明顯曾強胰島素受體-α(insulin-receptorαsubunit，InsR-α)、胰島素底物1 (insulin-receptor substrate-1，IRS-1)和磷脂酸肌醇

10、3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)三個胰島素信號傳導分子在腎小管上皮細胞胞漿中的表達，從而增強胰島素信號傳導，改善胰島素抵抗。此外，Methylswertianin和 Bellidifolin還能增加肝糖原的含量，增加肝臟中葡萄糖激酶的活性并降低葡萄糖-6-磷酸酶的活性，因而降低胰島素抵抗導致的高血糖。證實了改善胰島素抵抗為其抗糖尿病機制。
　　 最后，為了更好的開發(fā)和利用紫紅獐牙菜的

11、藥用價值，我們對紫紅獐牙菜的資源與質量評價進行了研究。
　　 本研究用高效液相色譜法對采收于湖北西部10個地點的紫紅獐牙菜進行了HPLC指紋圖譜研究。結果表明紫紅獐牙菜指紋圖譜具有比較好的穩(wěn)定性和重復性，10批紫紅獐牙菜樣品指紋圖譜的特征性和專屬性很強，13個共有峰的穩(wěn)定性很好。通過相似度分析方法解析，表明紫紅獐牙菜的指紋圖譜相似程度良好，符合指紋圖譜相似度要求，可以用于紫紅獐牙菜的鑒定和質量評價.該方法的建立為紫紅獐牙菜質量的

12、全面控制提供了參考。
　　 本研究用高效液相色譜法對Swertiamarin、Mangiferin、Swertianolin和Bellidifolin四種活性成分進行了分析。結果表明在選定的色譜條件下四種成分分離良好，在檢測濃度范圍內線性良好。最低檢測限和定量限分別大于0.86 μg/ml和1.73μg/ml。日內和日間精密度RSD%分別小于2%和 4.6%，加樣回收率為97.94%-99.84%。建立了獐牙菜屬植物中四種不同化