中藥地錦草抗HBV活性成分研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(HBV)感染嚴(yán)重危害人類的生命與健康，現(xiàn)有的抗HBV藥物主要為核苷類藥物。該類藥物在臨床上對(duì)于抑制病毒復(fù)制，緩解病人癥狀起到了積極的作用，但仍存在不能徹底地清除病毒、停藥易反彈、耐藥性等主要問題。因此，從中草藥中發(fā)現(xiàn)并研發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型抗HBV藥物是重要途徑。
　　 前期實(shí)驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn)中藥地錦草體外具有抗HBV作用，其活性部位為EHE-2和EHE-3。本研究采用HepG2.2.15細(xì)胞模型指導(dǎo)地錦草分離純化的

2、方法，深入、系統(tǒng)地開展了地錦草抗HBV活性部位的化學(xué)成分研究，評(píng)價(jià)了黃酮類化合物的體外抗HBV活性，初步分析了黃酮類化合物的構(gòu)效關(guān)系，進(jìn)一步探討了活性化合物的抗病毒作用機(jī)理。
　　 地錦草(Euphorbia humifusa Wilid.)為大戟科大戟屬植物，全草入藥，主治菌痢、腸炎、咳血、吐血、便血、崩漏、外傷出血、濕熱黃疸、乳汁不通、痛腫疔瘡和跌打腫痛等。
　　 本研究通過各種色譜分離技術(shù)，從地錦草抗HBV活性部位

3、分離得到40個(gè)單體化合物，運(yùn)用MS，1D-NMR，2D-NMR，NOESY，CD和UV等波譜技術(shù)，鑒定了其中38個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，分別為phyllanthusiin E methyl ester(EHE-2-3-1)，短葉蘇木酚酸甲酯( EHE-2-3-2)，短葉蘇木酚酸(EHE-2-3-3)，1-O-乙基．3，6-0-(R)-六羥基聯(lián)苯二甲?；?('C4)-β-D-葡萄糖苷(EHE-2-3-4)，地錦草酮（EHE-2-3-5），芙蘆草素

4、(EHE-2-3-6)，橡梳酸雙內(nèi)酯（EHE-2-3-7），1-(2’，3’，4’，5’-四羥基戊基)-6，7二甲基，喹嗯啉-2，3(1H,4H)-二酮（EHE-2-3-8），沒食子酸（EHE-2-3-10），沒食子酸甲酯( EHE-2-3-11)，芹菜素-6，8-二-C-β-D-葡萄糖苷(EHE-2-3-12)，7”-乙基．地榆酸雙內(nèi)酯(EHE-2-3-13)，(1R,9S，11R)-5(Z)，7(Z)-二烯-6-羰基-12-羥基．丁

5、香烷（EHE-2-3-14），1-O-甲基-6-O-p-二沒食子酰基-α-D-葡萄糖昔(EHE-2-3-15)，1-O-乙基-6-O-p-二沒食子?；?α-D-葡萄糖苷(EHE-2-3-16)，1-O-甲基-6-O-p-二沒食子?；?β-D-葡萄糖苷(EHE-2-3-17)，(1R,8S，9S，11R)-5(Z)-烯-6-羰基-8，12-二羥基-丁香烷(EHE-2-3-18)，地榆酸雙內(nèi)酯(EHE-2-4-1)，短葉蘇木酚(EHE-3.

6、4-1)，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-2)，木犀草素-7-O-(6”-O-阿魏酰)-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-3)，芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-4)，芹菜素-7-O-(6”-O-沒食子酰)-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-5)，木犀草素-7-O-(6”-O-香豆酰)-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-6)，芹菜素-7-O-β-D-蘆丁糖苷(EHE-3-4-7)，芹菜素-7-O-β-

7、D-芹糖(1→2)-β-D-葡萄糖苷(EHE-3-4-8)，芹菜素(EHE-3-4-9)，槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖(1→6)-β-D-半乳糖苷(EHE-3-4-10)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷和槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(EHE-3-4-11)，鞣花酸(EHE-3-4-12)，橙皮苷(EHE-3-4-13)，短葉蘇木酚酸乙酯(EHE-3-4-15)，3，3’-二甲氧基鞣花酸-4-O-13-D-葡萄糖苷(EHE-3-4

8、-16)，沒食子酸乙酯（EHE-3-4-17），3，3’-二甲氧基鞣花酸（EHE-3-5-1），木犀草素(EHE-3-5-2)和槲皮素(EHE-3-5-3)。所得化合物中，7個(gè)新化合物：EHE-2-3-4，EHE-2-3-5，EHE-2-3-13，EHE-2-3-14，EHE-2-3-16，EHE-2-3-18和EHE-3-4-5；24個(gè)化合物為首次從該植物分得：EHE-2-3-1,EHE-2-3-2,EHE-2-3-3,EHE-2-3

9、-6,EHE-2-3-7,EHE-2-3-8,EHE-2-3-11,EHE-2-3-12,EHE-2-3-15,EHE-2-3-17,EHE-2-4-1,EHE-3-4-3,EHE-3-4-6, EHE-3-4-7, EHE-3-4-8, EHE-3-4-9, EHE-3-4-10, EHE-3-4-11,EHE-3-4-13,EHE-3-4-15,EHE-3-4-16,EHE-3-4-17和EHE-3-5-1.
　　 采用He

10、pG2.2.15細(xì)胞模型，評(píng)價(jià)了黃酮類化合物的體外抗HBV活性，首次發(fā)現(xiàn)了4個(gè)抗HBV活性化合物(EHE-3-4-2，EHE-3-4-3，EHE-3-4-4和EHE-3-4-5)?；衔顴HE-3-4-2體外主要對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞中HBsAg分泌具抑制作用，IC50為20μg·mL·1（44.64μM）；化合物EHE-3-4-3體外對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞中HBeAg分泌的抑制作用明顯，IC50為75.81μg·mL-1（12

11、1.49μM），對(duì)HBsAg分泌抑制率為18.6％（80μg·mL-1）；化合物EHE-3-4-4和EHE-3-4-5體外對(duì)HepG2.2.15細(xì)胞中HBeAg、HBsAg分泌均具劑量依賴性的抑制作用，IC50分別為34.71μg·mL-1(80.351aM)和16.27μg·mL-1(37.66μM),75.75μg·mL-1(129.71μM)和36.90μg·mL-1(63.18μM).
　　 初步的構(gòu)效關(guān)系分析結(jié)果表明：

12、黃酮類化合物結(jié)構(gòu)中糖基數(shù)量對(duì)其抗HBV活性具有決定作用，表現(xiàn)為黃酮單糖苷>黃酮二糖苷，同時(shí)也決定了該類化合物的體外細(xì)胞毒性，表現(xiàn)為黃酮苷元>黃酮單糖苷>黃酮二糖苷；黃酮母核結(jié)構(gòu)與化合物的抗HBV活性關(guān)系密切，呈現(xiàn)出芹菜素單糖苷>木犀草素單糖苷>槲皮素單糖苷；酰基取代的黃酮糖苷仍具有較好的體外抗HBV活性，表現(xiàn)為沒食子酰基>阿魏?；?香豆?；?。
　　 地錦草抗HBV活性成分研究的結(jié)果表明，通過對(duì)活性部位EHE-2和EHE-3的化學(xué)

13、成分研究，分離鑒定了38個(gè)單體化合物（15個(gè)黃酮類、20個(gè)酚類、2個(gè)倍半萜類和1個(gè)生物堿類化合物），其中7個(gè)為新化合物，24個(gè)化合物為首次從該植物分得；通過黃酮類化合物抗HBV活性評(píng)價(jià)，首次發(fā)現(xiàn)了4個(gè)活性化合物，并初步分析了其構(gòu)效關(guān)系。
　　 本研究發(fā)現(xiàn)了體外具有較好抗HBV活性的黃酮類化合物，針對(duì)活性化合物開展體內(nèi)藥效學(xué)研究，有希望成為抗HBV候選藥物：該植物的活性部位富含黃酮類化合物，成分集中且體外具有抗HBV活性，開展活性