獐牙菜苦苷生物轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、藏茵陳主要來源于龍膽科（Gentianaceac）獐牙菜屬（Swertia）植物，該屬植物多種中藥、民族藥及民間藥均有長期治療肝炎的臨床背景。藏茵陳在《晶珠本草》、《四部醫(yī)典》及《甘露本草明鏡》等藏藥經(jīng)典著作中均有記載，主要功能為清熱消炎、利膽退黃。主治各種熱病，尤以治療肝炎后高膽紅素血癥、急性黃膽肝炎、慢性肝炎而著稱。獐牙菜苦苷是藏茵陳的主要活性成分之一。 采用三株真菌：黑曲霉、米曲霉和康氏木霉及二株腸內(nèi)菌：短乳桿菌和大腸桿菌

2、對獐牙菜苦苷轉(zhuǎn)化后發(fā)現(xiàn)，短乳桿菌和大腸桿菌對獐牙菜苦苷沒有可見的轉(zhuǎn)化作用；三株真菌均對獐牙菜苦苷起到了一定程度的轉(zhuǎn)化作用，生成了三個產(chǎn)物。黑曲霉對獐牙菜苦苷的轉(zhuǎn)化率最高，達(dá)到36％，米曲霉和康氏木霉次之，分別為15％和8％。 獐牙菜苦苷轉(zhuǎn)化液經(jīng)分離、純化得到兩個轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，經(jīng)過波譜解析鑒定為：（52）-5-ethylidene-8-hydroxy-3，4，5，6，7，8-hexahydro-1H-pyrano[3，4-c]pyri

3、din-1-one（M1）和紅百金花內(nèi)酯（M3）。紅百金花內(nèi)酯是一個已知的活性化合物，具有保護(hù)皮膚細(xì)胞的作用；M1為一個新化合物。體外抗菌活性研究表明，M1對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌具有一定程度的抑制活性。 黑曲霉培養(yǎng)液經(jīng)硫酸銨沉淀、透析及DEAE-Sepharose凝膠柱分離、純化，得到了一個與獐牙菜苦苷轉(zhuǎn)化相關(guān)的β-葡萄糖苷酶。經(jīng)測定此酶分子量約為88KDa，最適pH5.0-6.0，最適溫度為50-60℃。在60℃以下有良好

4、的熱穩(wěn)定性。Mg2+和Mn2+對此酶具有一定的激活作用，而Ca2+、Zn2+、Fe3+和Cu2+則能抑制該酶；p-NPG與纖維二糖是其合適的底物，獐牙菜苦苷次之；葡萄糖對該酶的抑制常數(shù)為0.25 mM，表明葡萄糖對該酶具有較強(qiáng)的抑制能力。 轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化結(jié)果表明，在變溫培養(yǎng)條件下，產(chǎn)M1的最優(yōu)轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基為MgSO4·7H2O5.14 mg/mL，MnSO4·4H2O3.42 mg/mL，葡萄糖9.95 mg/mL，蛋白胨9.24