柑橘衰退病毒S45分離物序列分析及蚜蟲(chóng)傳播對(duì)其群體結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus，CTV)引起的柑橘衰退病(Tristeza)是柑橘上發(fā)生最廣泛、為害嚴(yán)重的病毒病，對(duì)柑橘產(chǎn)業(yè)存在嚴(yán)重的威脅。CTV屬于長(zhǎng)線形病毒科(Closteroviridae)長(zhǎng)線形病毒屬(Closterovirus)成員，基因組全長(zhǎng)約為19.3 kb，是已知基因組最大的植物病毒，目前已報(bào)道有27個(gè)CTV分離物的全基因組序列。由于該病毒的高度分子變異及重組現(xiàn)象的普遍存在，該群體結(jié)構(gòu)也相對(duì)較復(fù)

2、雜。在自然條件下，CTV主要通過(guò)蚜蟲(chóng)傳播，其中褐色橘蚜是其最有效的傳播媒介。本研究組前期研究發(fā)現(xiàn)CTV分離物S45(CTV-S45)內(nèi)存在多個(gè)分子變種，并對(duì)其部分序列進(jìn)行了分析。為進(jìn)一步明確該CTV分離物的群體結(jié)構(gòu)和分子特點(diǎn)，本研究進(jìn)一步對(duì)CTV-S45進(jìn)行了基因組序列研究，并分析了蚜蟲(chóng)傳播后其分子變種組成的變化，結(jié)果如下:
　　 1.在前期初步測(cè)序的基礎(chǔ)上，分6個(gè)片段設(shè)計(jì)8對(duì)引物，對(duì)CTV-S45基因組的5'端6-5340nt

3、和近3'端9516-15965nt進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，每擴(kuò)增片段選取3-11個(gè)單克隆進(jìn)行測(cè)序，序列比對(duì)的結(jié)果顯示，各片段均存在一定分子變異，為2-6個(gè)分子變種組成的群體。其中U(6-725 nt)、X(9516-11236nt)和Z(13426-15965nt)片段存在與弱毒株系T30及強(qiáng)毒株系NZRB-G90分別具有較高序列相似性的分子變種，相似性在97.8-99.0％。X片段的分子變種組成最為復(fù)雜，具6個(gè)分子變種。序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)X和

4、W片段存在重組現(xiàn)象。
　　 2.采用DNAMAN軟件對(duì)本研究所測(cè)定序列和本實(shí)驗(yàn)室前期獲得的序列進(jìn)行比對(duì)和拼接，獲得1個(gè)19256nt(命名為S45-R)的全長(zhǎng)基因組序列和2個(gè)大小分別為9690nt(S45-R1，1-9690nt)和5120 nt(S45-R2，10846-15965nt)的部分基因組序列。核苷酸序列比對(duì)結(jié)果表明，S45-R與GenBank上已登錄的27個(gè)分離物的基因組序列相似性為80.0％-90.9％，與弱毒株

5、系T30核苷酸序列相似性最高，為90.9％，但其CP基因與強(qiáng)毒株系NZRB-G90相似性最高，為97.5％，與T30為91.5％;測(cè)定P23蛋白的某個(gè)氨基酸來(lái)鑒定強(qiáng)弱毒株系顯示為弱毒株系，該結(jié)果進(jìn)一步表明CTV-S45基因組內(nèi)存在重組現(xiàn)象。S45-R1與T30相應(yīng)部分序列相似性最高，為98.2％。S45-R2與NZRB-G90相應(yīng)序列相似性最高，為98.1％。
　　 3.以CTV-S45為毒源，采用褐色橘蚜對(duì)22株甜橙實(shí)生苗進(jìn)行