海生紅藻R-藻紅蛋白的亞基特性分析及其化學(xué)穩(wěn)定化的研究.pdf

1、本研究以海生大型紅藻異管藻(Heterosiphonia japonica)和多管藻(Polysiphonia urceolata)為材料,用50mmol/L磷酸緩沖液浸泡兩種藻,經(jīng)過超濾后用Sephadex G-200或Sephadex G-150凝膠過濾分離R-藻紅蛋白并用DEAE-Sepharose FF離子交換層析進(jìn)行純化、制備R-藻紅蛋白。純化異管藻R-藻紅蛋白(HR-PE)的pI為4.6,多管藻R-藻紅蛋白(PR-PE)的p

2、I為4.5。SDS-PAGE和變性等電聚焦(denaturing isoelectric focusing,denaturing-IEF)分析結(jié)果表明,HR-PE和PR-PE在SDS-PAGE中的亞基帶少于其在denaturing-IEF中的有色亞基帶。二維電泳中的結(jié)果證明:在SDS-PAGE中分子質(zhì)量相同的亞基,在denaturing-IEF中表現(xiàn)出不同pI;而 denaturing-IEF中的單一條帶在第二維SDS-PAGE中則被分

3、離出多于一種不同分子質(zhì)量的亞基帶。這表明在組成HR-PE和PR-PE亞基中,分子質(zhì)量相同的同類亞基可能具有不同的pI,而在denaturing-IEF中具有相同pI的亞基可能在SDS-PAGE中表現(xiàn)不同的分子質(zhì)量。
　　用甲醛和EDC(1-乙基-3-3-二甲基氨基丙基-碳二亞胺鹽酸鹽)進(jìn)行的HR-PE和PR-PE化學(xué)穩(wěn)定化實驗結(jié)果表明:1)適合的甲醛與HR-PE反應(yīng)比例為212.3?1.0,其適合反應(yīng)濃度為0.5310mg/ml;

4、PR-PE的適合濃度為1.11mg/ml,甲醛與PR-PE的反應(yīng)比例為54.7?1.0;2)HR-PE與EDC的適合反應(yīng)濃度分別為3.0mg/ml和3.0mmol/L,而PR-PE與EDC的適合反應(yīng)濃度為3.0mg/ml和5.0mmol/L。與天然R-藻紅蛋白相比,甲醛和EDC穩(wěn)定化的HR-PE和PR-PE對溫度、8mol/L尿素、4％SDS及8%SDS的耐受程度都有顯著提高,而且甲醛穩(wěn)定化產(chǎn)物比EDC穩(wěn)定化產(chǎn)物有更好的穩(wěn)定性。利用雙功