蛋白A—藻藍(lán)蛋白β亞基雙功能蛋白的性質(zhì)及其在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、免疫測(cè)定技術(shù)的應(yīng)用遍及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品檢驗(yàn)等諸多領(lǐng)域，尤其是其分支之一標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)自1959年創(chuàng)立以來迅速發(fā)展。對(duì)于能使測(cè)定過程更簡(jiǎn)單、快速新型免疫標(biāo)記物的開發(fā)一直是研究的熱點(diǎn)，標(biāo)記物的靈敏度、特異性和安全性決定了其實(shí)用價(jià)值。本研究中所利用的藻藍(lán)蛋白的特殊物理及光學(xué)性質(zhì)就使之十分適合作為熒光免疫的標(biāo)記物。
　　 在本研究中，將金黃色葡萄球菌的總DNA作為模板，通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增出目的片段即金黃色葡萄球菌蛋白A基因

2、（spa），并通過酶切位點(diǎn)的轉(zhuǎn)換成功構(gòu)建表達(dá)載體pET-spa。其后，利用實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)成功構(gòu)建并保存的質(zhì)粒pET-cpcB，構(gòu)建能表達(dá)融合蛋白SPA-CpcB融合質(zhì)粒pET-spa-cpcB。
　　 將構(gòu)建的SPA-CpcB融合基因與兩種藻膽色素（藻藍(lán)色素和藻紅色素）分別和藻膽蛋白裂合酶CpeS進(jìn)行體內(nèi)共表達(dá)，并檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物的熒光活性。將SPA-CpcB與生物素標(biāo)記的兔抗體進(jìn)行熒光免疫反應(yīng)并通過多功能微孔板熒光檢測(cè)儀檢測(cè)。結(jié)果表明